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jza63

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用Ni柱纯化蛋白后镍柱结晶了,该怎么办 已有3人参与

由于蛋白在包涵体里,所以用尿素裂解包涵体后,上镍柱纯化蛋白,可是纯化的过程中镍柱逐渐结晶,结块了,请问各位该怎么处理,才能再次使用。
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胡程

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是不是尿素加多了,应该6M和8M较为常见,另外,你可以选择先复性再纯化(非变性条件下)
做最好的自己
2楼2015-03-20 08:31:25
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
变性条件下纯化包涵体,在常温下进行,可以减少尿素结晶,纯化完尽快清洗NI柱,可以用温热的缓冲液清洗柱填料。如果效果还是不明显,只能考虑活化了,先用NAOH清洗柱子,然后重新挂NI,具体的有说明书。
3楼2015-03-20 10:26:46
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有个办法,就是2L说的先复性再过柱子,如果不想复性,可以先降低尿素的浓度,降到6M-4M这样子,再纯化。
4楼2015-03-20 10:29:27
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我昨天做的纯化,也结晶了,最后用6M尿素和0.1Mnaoh洗了,今天明显看到,柱子恢复了,祝你好运,
踏实
5楼2015-03-20 15:22:50
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