应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » KOD酶经镍柱纯化后失活，什么原因？
41/1返回列表
查看: 1058  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhoubin0823

木虫 (小有名气)

[交流] KOD酶经镍柱纯化后失活，什么原因？

诱导表达的KOD酶（耐高温），经过热处理得到粗酶液，一部分经硫酸铵沉淀、酶存储液溶解得到酶液A。另一部分过镍柱、300mM咪唑洗脱、经硫酸铵沉淀、酶存储液溶解得到酶液B，相同条件下分别使用酶液A、B进行PCR，结果显示酶液A能pcr出目的条带，酶液B却不能pcr出条带，蛋白电泳验证酶液B的浓度与酶液A的浓度基本一致，想与各位虫友交流一下，到底酶液B是怎么失活的，有没有可能是镍柱上镍离子或300mM咪唑使KOD酶构象发生改变？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-04 10:38:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
★
zhoubin0823: 金币+1, 谢谢 2015-03-04 12:51:17
路过的看了一下，帮顶，新春快乐！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
赞一下(1人) 回复此楼
自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
2楼2015-03-04 11:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang001zh

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是和ni离子有关系吧，酶一般对金属离子很敏感，可以加2mM EDTA看看效果

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-03-04 15:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhoubin0823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-03-04 15:20:59
应该是和ni离子有关系吧，酶一般对金属离子很敏感，可以加2mM EDTA看看效果

做过在酶液中加镍离子的实验，低浓度下基本没有影响，直到加入的镍离子使酶液颜色改变才会有影响。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-03-05 14:12:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhoubin0823 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭