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zhoubin0823木虫 (小有名气)
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[交流]
KOD酶经镍柱纯化后失活，什么原因？
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| 诱导表达的KOD酶（耐高温），经过热处理得到粗酶液，一部分经硫酸铵沉淀、酶存储液溶解得到酶液A。另一部分过镍柱、300mM咪唑洗脱、经硫酸铵沉淀、酶存储液溶解得到酶液B，相同条件下分别使用酶液A、B进行PCR，结果显示酶液A能pcr出目的条带，酶液B却不能pcr出条带，蛋白电泳验证酶液B的浓度与酶液A的浓度基本一致，想与各位虫友交流一下，到底酶液B是怎么失活的，有没有可能是镍柱上镍离子或300mM咪唑使KOD酶构象发生改变？ |
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