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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » KOD酶经镍柱纯化后失活，什么原因？
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

[交流] KOD酶经镍柱纯化后失活，什么原因？

诱导表达的KOD酶（耐高温），经过热处理得到粗酶液，一部分经硫酸铵沉淀、酶存储液溶解得到酶液A。另一部分过镍柱、300mM咪唑洗脱、经硫酸铵沉淀、酶存储液溶解得到酶液B，相同条件下分别使用酶液A、B进行PCR，结果显示酶液A能pcr出目的条带，酶液B却不能pcr出条带，蛋白电泳验证酶液B的浓度与酶液A的浓度基本一致，想与各位虫友交流一下，到底酶液B是怎么失活的，有没有可能是镍柱上镍离子或300mM咪唑使KOD酶构象发生改变？
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1楼 2015-03-04 10:38:02
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
★
zhoubin0823: 金币+1, 谢谢 2015-03-04 12:51:17
路过的看了一下，帮顶，新春快乐！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
2楼2015-03-04 11:16:28
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zhang001zh

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是和ni离子有关系吧，酶一般对金属离子很敏感，可以加2mM EDTA看看效果

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3楼2015-03-04 15:20:59
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-03-04 15:20:59
应该是和ni离子有关系吧，酶一般对金属离子很敏感，可以加2mM EDTA看看效果

做过在酶液中加镍离子的实验，低浓度下基本没有影响，直到加入的镍离子使酶液颜色改变才会有影响。
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4楼2015-03-05 14:12:14
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