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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 用Ni柱纯化蛋白后镍柱结晶了，该怎么办
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jza63

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用Ni柱纯化蛋白后镍柱结晶了，该怎么办 已有3人参与

由于蛋白在包涵体里，所以用尿素裂解包涵体后，上镍柱纯化蛋白，可是纯化的过程中镍柱逐渐结晶，结块了，请问各位该怎么处理，才能再次使用。
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1楼 2015-03-19 21:05:55
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胡程

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是不是尿素加多了，应该6M和8M较为常见，另外，你可以选择先复性再纯化（非变性条件下）
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做最好的自己
2楼2015-03-20 08:31:25
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
变性条件下纯化包涵体，在常温下进行，可以减少尿素结晶，纯化完尽快清洗NI柱，可以用温热的缓冲液清洗柱填料。如果效果还是不明显，只能考虑活化了，先用NAOH清洗柱子，然后重新挂NI，具体的有说明书。
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3楼2015-03-20 10:26:46
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还有个办法，就是2L说的先复性再过柱子，如果不想复性，可以先降低尿素的浓度，降到6M-4M这样子，再纯化。
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4楼2015-03-20 10:29:27
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我昨天做的纯化，也结晶了，最后用6M尿素和0.1Mnaoh洗了，今天明显看到，柱子恢复了，祝你好运，
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踏实
5楼2015-03-20 15:22:50
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