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sci1988

银虫 (小有名气)

[求助] PCR产物跑胶老是拖尾,这是怎么回事? 已有6人参与

产物跑0.8%的胶时,老是出现拖尾问题,跑胶时电压100v,大家看看什么情况?

PCR产物跑胶老是拖尾,这是怎么回事?
Administrator 2015-03-19 15 时 09 分.jpg
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
拖尾可以换个试剂试试,但主要的是引物没批出来。
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-03-19 15:54:33
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biolinker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个不是跑胶的问题,主要是你的引物和PCR程序的问题。
3楼2015-03-19 16:18:30
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sci1988

银虫 (小有名气)

这个主要pcr的片段为约5kb,中间也是有片段的,不知道咋拖这么多
4楼2015-03-19 16:25:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
5kb的模板,不小,对于引物来说设计的要求更高了一些,但主要还是用酶吧,普通的酶应该扩不出来,一般的化学修饰热启动酶效果很好小于8kb一下都能够很好的扩增http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-03-19 17:07:09
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素锦流年1991

新虫 (初入文坛)

应该是PCR的问题,从图中可看出marker跑的很好,应该不是电泳的问题,建议改变PCR条件,重新进行PCR,
6楼2015-03-19 18:22:33
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老脸挂不住

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换一对引物看看吧,我当初拖尾的现象就是换了引物才解决掉的
我要这天,再遮不住我眼要这地,再埋不了我心要这众生,都明白我意要那诸佛,都烟消云散
7楼2015-03-22 21:48:31
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小妖的语言

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

maker也能被跑成这样人才了   条带还竟然歪   胶没做好,PCR体系有问题 注意退火温度,DNA提取的质量可能不好,引物设计有问题。
8楼2015-05-28 16:18:31
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没想好名字

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先,你电压太低了,建议改为120V或130V试试,其次,你压根就没有目的条带,自己好好调整下条件或换下引物。
9楼2015-05-29 12:54:54
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cocowant

新虫 (初入文坛)

楼主最后换引物做出来了吗?我也出现了这种问题,但是别人做能做出来。
10楼2022-04-07 14:17:09
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