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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量的扩增曲线不好,溶解曲线也不平滑 已有1人参与

荧光定量的扩增曲线一直没有到平台期,增加4个循环之后还是没有到平台期,而且溶解曲线也不平滑,有很多杂峰。求助高手,怎么解决这个问题
我的原始条件是
20ul体系
MIX   9ul
模板  2ul
引物   1*2 ul
水     8 ul
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
弯弓射雕29: 金币+20, 有帮助 2015-03-17 10:47:17
引用回帖:
4楼: Originally posted by 弯弓射雕29 at 2015-03-15 21:12:25
不好意思,我写错了,引物0.5
,mix是2乘的...

如果是2乘的,严格的应该用10ul吧。没有进入平台期可能确实是目的片段浓度低导致起峰晚。
5楼2015-03-16 08:30:03
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这体系是不就有问题,和不是20ul吧,MIX是几乘的了,为什么加9?
2楼2015-03-15 08:10:52
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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-03-15 08:10:52
你这体系是不就有问题,和不是20ul吧,MIX是几乘的了,为什么加9?

我们实验室的也是这个体系,我们老师说有的样品没有P出来,但是我不知道怎么改良。体系应该没有问题,师兄师姐都做出来了。
3楼2015-03-15 11:06:34
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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-03-15 08:10:52
你这体系是不就有问题,和不是20ul吧,MIX是几乘的了,为什么加9?

不好意思,我写错了,引物0.5
,mix是2乘的
4楼2015-03-15 21:12:25
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