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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量的扩增曲线不好，溶解曲线也不平滑
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量的扩增曲线不好，溶解曲线也不平滑 已有1人参与

荧光定量的扩增曲线一直没有到平台期，增加4个循环之后还是没有到平台期，而且溶解曲线也不平滑，有很多杂峰。求助高手，怎么解决这个问题
我的原始条件是
20ul体系
MIX   9ul
模板  2ul
引物   1*2 ul
水     8 ul
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    • 2015-03-14 10:04:39, 162 K

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1楼 2015-03-14 10:08:59
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这体系是不就有问题，和不是20ul吧，MIX是几乘的了，为什么加9？
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2楼2015-03-15 08:10:52
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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-03-15 08:10:52
你这体系是不就有问题，和不是20ul吧，MIX是几乘的了，为什么加9？

我们实验室的也是这个体系，我们老师说有的样品没有P出来，但是我不知道怎么改良。体系应该没有问题，师兄师姐都做出来了。
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3楼2015-03-15 11:06:34
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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-03-15 08:10:52
你这体系是不就有问题，和不是20ul吧，MIX是几乘的了，为什么加9？

不好意思，我写错了，引物0.5
,mix是2乘的
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4楼2015-03-15 21:12:25
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
弯弓射雕29: 金币+20, ★有帮助 2015-03-17 10:47:17
引用回帖:
4楼: Originally posted by 弯弓射雕29 at 2015-03-15 21:12:25
不好意思，我写错了，引物0.5
,mix是2乘的...

如果是2乘的，严格的应该用10ul吧。没有进入平台期可能确实是目的片段浓度低导致起峰晚。
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5楼2015-03-16 08:30:03
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弯弓射雕29

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2015-03-16 08:30:03
如果是2乘的，严格的应该用10ul吧。没有进入平台期可能确实是目的片段浓度低导致起峰晚。...

那我应该加大模板量是吗?
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6楼2015-03-17 10:44:12
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 弯弓射雕29 at 2015-03-17 10:44:12
那我应该加大模板量是吗?...

可以试试，可能会管用。
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7楼2015-03-17 12:17:48
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