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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母表达大量发酵无酶活
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

[求助] 毕赤酵母表达大量发酵无酶活已有2人参与

各位虫友，最近再做毕赤酵母表达，用的是pGAPZ alpha A这个载体，测序阅读框正确，整合到基因组上以后提酵母DNA，用测序引物PCR验证已整合上去。空载做对照，10ml发酵能明显测出酶活，但是用100ml发酵就测不到酶活了，连续测2个周都没有，请问有人遇到类似的问题吗，解决不了好捉急啊！
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1楼2015-03-05 13:30:57
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2015-03-09 12:40:46
老板要求的，我自己也不想做，凌晨一点是我这里下午4点钟。毕赤酵母很不好表达吗？...

，下午四点钟。。。。。
不知道对你有没有用，上传了一份文件。
不过你们老板是啥心态哦，无论用什么表达，只要表达出来不就行啦，哎搞不懂丫。
毕赤酵母我是不太理解，但是做熟练了之后应该也是不难的吧
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  • 附件 1 : 毕赤酵母表达操作手册（精译版）.pdf
    • 2015-03-09 13:13:32, 837.36 K
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-03-09 13:16:49
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wt29088

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用大摇瓶、提高摇床转速看能不能解决问题。
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2楼2015-03-05 14:48:55
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wt29088 at 2015-03-05 14:48:55
用大摇瓶、提高摇床转速看能不能解决问题。

用500的瓶子放100ml 培养基摇的，转速220，已经提不高了啊。
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3楼2015-03-06 10:31:07
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
尝试用原核表达一下呢
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-03-06 13:27:38
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