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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母发酵表达蛋白量的测定
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阿里西西的梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤酵母发酵表达蛋白量的测定 已有3人参与

毕赤酵母发酵某个未知目的蛋白，如何比较准确的测定其表达量，用于后续条件优化，急！！！跪求大家多多指教。。
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1楼 2015-01-10 23:17:39
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
★ ★
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2015-01-14 16:12:47
可以测总蛋白量，公司有现成的试剂盒，Lowery法，BCA法这些都有。如果要目的蛋白的蛋白量，我觉得可以看SDS-PAGE的目的条带就可以了。既然是做优化，知道多了少了就行，也不需要具体量吧。如果每次都要纯化了测量，纯化过程中损耗太多了。

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2楼2015-01-13 00:19:45
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有这个未知蛋白的信息，一点信息都没有，实在不好做啊？
如果这个蛋白是过表达量很高的，也可以按照总蛋白的量进行估计。用BCA和Bradford试剂盒，或者跑个电泳染色看一下，大体估计一下量。
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3楼2015-01-13 09:23:58
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阿里西西的梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ggyy0911 at 2015-01-13 00:19:45
可以测总蛋白量，公司有现成的试剂盒，Lowery法，BCA法这些都有。如果要目的蛋白的蛋白量，我觉得可以看SDS-PAGE的目的条带就可以了。既然是做优化，知道多了少了就行，也不需要具体量吧。如果每次都要纯化了测量， ...

因为是学生所以最好是能有表达量的数据，如果只是page图，写文章也不好写，并且我通过bca法测过随着发酵时间的延长测的总蛋白竟没差异。。。
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4楼2015-01-14 15:25:31
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阿里西西的梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 馒头爱生物 at 2015-01-13 09:23:58
有没有这个未知蛋白的信息，一点信息都没有，实在不好做啊？
如果这个蛋白是过表达量很高的，也可以按照总蛋白的量进行估计。用BCA和Bradford试剂盒，或者跑个电泳染色看一下，大体估计一下量。

蛋白是我们自己构建的片段表达的，并且表达量也不高，就想通过优化条件来提高表达量，只能大体估测了吗？
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5楼2015-01-14 15:26:59
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jjwhl

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿里西西的梦 at 2015-01-14 15:26:59
蛋白是我们自己构建的片段表达的，并且表达量也不高，就想通过优化条件来提高表达量，只能大体估测了吗？...

楼主，你通过表达条件优化，蛋白表达量提高了吗
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6楼2015-04-28 17:14:37
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