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阿里西西的梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤酵母发酵表达蛋白量的测定 已有3人参与

毕赤酵母发酵某个未知目的蛋白,如何比较准确的测定其表达量,用于后续条件优化,急!!!跪求大家多多指教。。
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2015-01-14 16:12:47
可以测总蛋白量,公司有现成的试剂盒,Lowery法,BCA法这些都有。如果要目的蛋白的蛋白量,我觉得可以看SDS-PAGE的目的条带就可以了。既然是做优化,知道多了少了就行,也不需要具体量吧。如果每次都要纯化了测量,纯化过程中损耗太多了。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-01-13 00:19:45
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馒头爱生物

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有没有这个未知蛋白的信息,一点信息都没有,实在不好做啊?
如果这个蛋白是过表达量很高的,也可以按照总蛋白的量进行估计。用BCA和Bradford试剂盒,或者跑个电泳染色看一下,大体估计一下量。
3楼2015-01-13 09:23:58
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阿里西西的梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ggyy0911 at 2015-01-13 00:19:45
可以测总蛋白量,公司有现成的试剂盒,Lowery法,BCA法这些都有。如果要目的蛋白的蛋白量,我觉得可以看SDS-PAGE的目的条带就可以了。既然是做优化,知道多了少了就行,也不需要具体量吧。如果每次都要纯化了测量, ...

因为是学生所以最好是能有表达量的数据,如果只是page图,写文章也不好写,并且我通过bca法测过随着发酵时间的延长测的总蛋白竟没差异。。。
4楼2015-01-14 15:25:31
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阿里西西的梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 馒头爱生物 at 2015-01-13 09:23:58
有没有这个未知蛋白的信息,一点信息都没有,实在不好做啊?
如果这个蛋白是过表达量很高的,也可以按照总蛋白的量进行估计。用BCA和Bradford试剂盒,或者跑个电泳染色看一下,大体估计一下量。

蛋白是我们自己构建的片段表达的,并且表达量也不高,就想通过优化条件来提高表达量,只能大体估测了吗?
5楼2015-01-14 15:26:59
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jjwhl

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 阿里西西的梦 at 2015-01-14 15:26:59
蛋白是我们自己构建的片段表达的,并且表达量也不高,就想通过优化条件来提高表达量,只能大体估测了吗?...

楼主,你通过表达条件优化,蛋白表达量提高了吗
6楼2015-04-28 17:14:37
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