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michelle65铜虫 (初入文坛)
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毕赤酵母高密度发酵产酶溶氧达不到20%以上已有3人参与
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| 请问大家，我现在也在做毕赤酵母高密度发酵产酶，但是一直都没有成功。10L的发酵罐装液量为6L左右，接种量约5%，pH为5.0，温度30℃左右，转速为250rpm，通气为1.5 vvm，罐压为0.5 MPa左右，第一个阶段发酵了10h后DO降到了2左右，之后补加了甘油，溶氧有一点上升，大约到了14左右，但是后面有急速下降，之后溶氧一直维持在5以下。由于是国产的发酵罐，所以转速最高只能到300rpm，之后不知道没有酶活的原因是不是因为溶氧的原因，我做了10多次了，没有一次能看到手册上说的DO上升到100%的点，求指教啊。 |
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 高密度发酵 |
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10楼2014-07-17 11:23:22
winterb
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7楼2014-05-21 10:01:43
wt29088
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【答案】应助回帖
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michelle65: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-05-28 22:26:42
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10L的罐子，最高转速才300，明显太低了。 由于设备问题，你的DO很低，微生物前期生长慢，后期生长快，需氧量迅速上升。所以，你的菌种密度越高，或者说后期培养时间越长，DO值越低，生长情况肯定不好。 不知道你的是 muts 还是 mut+菌株。 建议 1、你的初始培养基配方中，甘油的量应该大幅度减少（初步建议10g/L），流加甘油时应该以甘油不积累为重点（要少量流加，不要依照手册上的那种流加方式）。而且就你的设备而言，最好酵母的湿重不要太高（没必要到200g/L以上，供氧能力太差了）。甲醇诱导的时候，同流加甘油一样，也要少加。（湿重太低，流加太多甲醇会导致酵母甲醇中毒），以甲醇不过量为准（即停止流加甲醇，DO较短时间内能够上升） 2、建议将你的发酵罐当做一个大摇瓶用，（使用 BMGY和BMMY培养基），操作方式和摇瓶上一样。但是罐上生长速度可能会比摇瓶上快。 所以，一旦发现甘油消耗完毕（DO快速反弹），饥饿后，每次添加0.5%-1%发酵液体积甲醇，观察到DO快速上升时，证明甲醇消耗完毕，再继续重复添加甲醇（起码40-50h   ）。或者两种方法结合，不过就是需要人靠在机器变上，搞得人困马乏。 3、还有一种方法是加纯氧（氧气：空气=1:1或者更小），但这也仅仅起缓解作用，没办法做到高密度。 第二种方法最靠谱，第一种方法还需要你自己摸索。 |
8楼2014-05-22 00:07:54
michelle65
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9楼2014-05-22 08:51:47