24小时热门版块排行榜    

查看: 3384  |  回复: 8

浣花道人

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 293细胞冻存和复苏

新手,很着急!!!想请教给位一个问题,最近我一直在养293细胞,之前从别人那里要来一株冻存的293细胞,正常复苏(1000rpm离心,悬浮,培养)养的很好,等细胞长得差不多了的时候,我就冻存了,将培养基倒掉后,加胰酶消化30s,然后悬浮,离心,弃去培养基,用冻存液悬浮(90%小牛血清+10%DMSO),然后放在冻存盒里-80冻存,第二天液氮,然后我选了一只复苏,却发现细胞没有之前正常的293细胞的形态,都是大的圆形的贴壁细胞,长得都不正常,非常着急,已经好几次都是这样了,请给我帮我出出主意,到底是哪出的问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglele87

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用胰酶消化后,我会用培养基洗一下细胞。洗去残余胰酶和一些细胞碎片。这是其一。
其二细胞冻存和复苏需要慢冻快化。楼主直接放负八十比较不可理。我建议先放到四度几个小时,然后再转到负二十过半天到一天,然后再负八十放上一两天,然后转液氮。
一生不羁放纵爱自由
2楼2015-03-05 10:10:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

364123299

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,冻得太快。我们一般包上一坨棉花放到负八十过夜,第二天再放液氮
3楼2015-03-05 14:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cclandrover

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-03-05 10:10:11
用胰酶消化后,我会用培养基洗一下细胞。洗去残余胰酶和一些细胞碎片。这是其一。
其二细胞冻存和复苏需要慢冻快化。楼主直接放负八十比较不可理。我建议先放到四度几个小时,然后再转到负二十过半天到一天,然后再 ...

用胰酶消化之后细胞都悬浮了,用培养基洗的话就都洗没了啊。。。。。。
4楼2015-03-05 15:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanglele87

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cclandrover at 2015-03-05 15:48:10
用胰酶消化之后细胞都悬浮了,用培养基洗的话就都洗没了啊。。。。。。...

通过离心,重悬来洗啊。。。关于冻存,有卖的专门的冻存盒,一小时降一度。。还有就是一定要传几代到细胞状态最好的时候冻存。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

一生不羁放纵爱自由
5楼2015-03-05 18:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbl215

金虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

怎么大家都说冻得太快,都没看清楚陈述。如果你所谓的冻存盒是程序降温盒,那就没错,整个描述看起来操作都没错,那只可能出在细节上。比如消化确实没过头,复苏时动作够快,水浴锅温度38度至40度,刚复苏离心力小一点,确保去除DMSO,弃取上清后吹散细胞动作也温柔点。你要回忆每一步可能有问题的地方啊,甚至试剂有没有配错,等等。细胞操作虽然简单,但是要做好的话,细节很重要,祝好运

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2015-03-05 19:33:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浣花道人

铁杆木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by hbl215 at 2015-03-05 19:33:58
怎么大家都说冻得太快,都没看清楚陈述。如果你所谓的冻存盒是程序降温盒,那就没错,整个描述看起来操作都没错,那只可能出在细节上。比如消化确实没过头,复苏时动作够快,水浴锅温度38度至40度,刚复苏离心力小一 ...

谢谢,你真的很懂我的意思,我好好再检查一遍,哈哈 谢谢啦
7楼2015-03-09 09:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浣花道人

铁杆木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-03-05 18:47:06
通过离心,重悬来洗啊。。。关于冻存,有卖的专门的冻存盒,一小时降一度。。还有就是一定要传几代到细胞状态最好的时候冻存。...

恩恩,谢谢啦 很详细
8楼2015-03-09 09:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jora0418

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用冻存盒,冻存盒的话可以直接放负80里面。
9楼2015-12-03 18:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 浣花道人 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 09:09 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见