应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » hepg2 细胞复苏
351/4返回列表1234下一页
查看: 3256  |  回复: 34
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

[求助] hepg2 细胞复苏 已有8人参与

我一个月前冻存的细胞，复苏两次了，都以失败告终啊。复苏时细胞量挺多的，但过夜后贴壁的细胞极少，换液后就剩一点儿了。如下图：



继续培养几天就这样了：



知道怎么回事嘛？我的冻存步骤是：收集细胞，加入1ml冻存液（10%DMSO）。4度10min，20度30min，-80度过夜，然后保存在液氮中。
复苏步骤是：从液氮中取出一管细胞后立即放入37度水浴中解冻，快速解冻后，再加入新鲜培养基过夜培养，换液。


能看出我的问题在哪嘛？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我要我的自由！
1楼 2014-04-25 13:48:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ohneyzhang

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我和楼主遇到的问题一样，细胞也不是污染，就是状态很差！我的问题是出在血清了。换BI血清后长势迅猛。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-04-25 23:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中，再向其中加入10ml培养基混匀，离心弃去上清，加入培养基重悬，最后加入培养皿中，过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液，我们一般都是细胞贴壁（6h左右）后换液，因为DMSO长时间可能对一些细胞有损伤。
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-25 14:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你的细胞悬液的量是多少？ 你的细胞在4℃放置的时间有点少，不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液，然后分装到两个细胞冻存管中，20℃30min，4℃1h，-20℃2h，-80℃过夜，在转移至液氮之中。每次都能够复苏成功，试了好多次是没有问题的。
不过现在我们实验室买了梯度冻存盒，细胞冻存管密封完之后直接放到梯度冻存盒中放入-80℃过夜，在转移至液氮之中就行了。
赞一下 回复此楼
不作死不会死！！！
3楼2014-04-25 16:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-25 14:52:20
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中，再向其中加入10ml培养基混匀，离心弃去上清，加入培养基重悬，最后加入培养皿中，过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液，我们一般都是细胞贴壁（6 ...

我也有试过离心后再培养，一样不行的。
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
4楼2014-04-25 16:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 16:14:44
不知道你的细胞悬液的量是多少？ 你的细胞在4℃放置的时间有点少，不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液，然后分装到两个细胞冻存管中，20℃30min， ...

我是一个大平皿的细胞用1ml冻存液。细胞量特别大。是不是细胞量太大也不行？
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
5楼2014-04-25 16:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kueradi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-25 16:57:22
我也有试过离心后再培养，一样不行的。...

如果是这样，那基本就是细胞冻坏了。冻存有问题。我们实验室用的是梯度冻存盒，所以不确定你冻存细胞的方式是否合适。
赞一下 回复此楼
6楼2014-04-25 17:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-25 16:58:17
我是一个大平皿的细胞用1ml冻存液。细胞量特别大。是不是细胞量太大也不行？...

细胞量还好，因为HepG2团块生长，传稀了长得太慢，我也是1：1冻，细胞太满的时候1:2冻。
赞一下 回复此楼
7楼2014-04-25 17:39:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-25 16:58:17
我是一个大平皿的细胞用1ml冻存液。细胞量特别大。是不是细胞量太大也不行？...

细胞量与冻存液的量一般是一比一的。你那样估计是冻存方式上出现了问题了！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
不作死不会死！！！
8楼2014-04-25 22:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wys476488620

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不太清楚楼主的细胞怎么回事  先说说我的吧  冻存 10%DMSO 40%血清 50%培养液 十的六次方细胞
4度1H  -20度 1H  -80度1H  液氮  
复苏  37度 速溶  然后加到50毫升离心管（加20毫升无血清培养基 ） 1000rpm 10min 4℃  弃上清
10%血清培养液 重悬 加合适的培养液在合适的培养瓶培养  

希望和楼主共同进步  养细胞确实是 一门技术活 用我老师的话说比养孩子都难
赞一下 回复此楼
踏踏实实的就行了
9楼2014-04-25 22:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丫头“笑笑” 的主题更新
351/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +3 守候夕阳CF 2026-03-18 3/150 2026-03-18 18:29 by 科研小拿拿
[考研] 085600材料与化工 +5 安全上岸！ 2026-03-16 5/250 2026-03-18 15:33 by cmz0325
[考研] 化工学硕306求调剂 +10 42838695 2026-03-12 10/500 2026-03-18 14:42 by haxia
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 307求调剂 +3 冷笙123 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:55 by macy2011
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭