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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » hepg2细胞遇到了大麻烦，求帮助！
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小雷想

铁虫 (正式写手)

[求助] hepg2细胞遇到了大麻烦，求帮助！ 已有8人参与

3月18日买的hepg2细胞，以前没有养过，养了一段时间，开始两天还好，但越来细胞表现出死亡的迹象：不增殖，细胞内有很多小的圆圆的亮泡，开始不知道这些细胞内的亮泡是怎么回事，后来查好像说是细胞老化或培养基有问题，培养基：高糖DMEM+10%~12%FBS+1%双抗，培养基鉴定没有污染。可是这是肝癌细胞系呀，怎么会老化呢，癌细胞不是有无限的增殖能力吗，现在细胞快死了，求高手指点，最好是养过这个细胞的高手指点。附图几张：第一张，细胞刚运输来时的照片，其余的是从瓶里传出来及培养几天的图片。谢谢各位了，急呀！图片上红色圈的是圆圆的亮泡。

hepg2细胞遇到了大麻烦，求帮助！
刚买来.JPG


hepg2细胞遇到了大麻烦，求帮助！-1
_3197857.JPG


hepg2细胞遇到了大麻烦，求帮助！-2
_3228021.JPG


hepg2细胞遇到了大麻烦，求帮助！-3
_3197854.JPG
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1楼 2014-04-03 12:38:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没记错的话，hepg2应该是mem培养基，当然用dmem也没多大关系。送来的时候细胞状态就不好了。如果是跟正规的机构买的细胞，你可以叫他们再寄一瓶。我觉得可能是你传代的时候消化太久了
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2楼2014-04-04 15:35:47
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是有白色的泡的，不是问题，第二张图片还可以，状态很好
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3楼2014-04-07 20:32:49
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blckly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小雷想: 金币+20, ★有帮助, 空泡状态是不是有问题？我向卖细胞的反映说有空泡，他们说什么空泡是正常的，他们的细胞是经过国际认证的。 2014-04-17 20:05:59
这个现象跟我以前遇到过的有点像，首先换新的血清和培养基试试，培养基没有污染不代表可以用来培养细胞，也有可能里面营养成分已经缺失了，如果实在不行就用胎牛血清培养一段时间。
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11楼2014-04-17 16:42:27
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张平1118

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我养过这个细胞，是有抱团生长的，而且长得还慢，用mem培养基，澳洲血清先养起来，再次传代时密度大点。
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13楼2014-04-19 09:40:20
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

七楼和八楼说的都挺好。你的细胞第一幅图是多少倍镜下拍出来的，可能是因为拍的原因导致这样的差劲图像。楼主说刚运过来的时候有亮泡，那个是因为细胞在路上颠簸之后导致生长状态变弱细胞贴壁能力下降进而细胞死亡漂浮在悬液之中。后来的图片可以看出细胞的生长状态已有好转，不过还有待很大的提高。楼主可以从消化上下下功夫，你的图中可以明显的看到好多细胞团聚集在一起，那个是因为消化不当引起的。主要可能是：1.消化时间过程，导致细胞消化过度，成片的脱落，出现细胞团；2.消化的过程中不要经常摇晃细胞瓶；3.细胞不要生长到太密，一般不要到八成以上。   还有楼主可以测量下你们的PBS的PH是多少，这个也是会影响细胞的生长状态的。
  这些就是我的建议啦，希望可以帮助到你。祝你好运！！！
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不作死不会死！！！
14楼2014-04-25 16:39:36
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普通回帖

小雷想

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2014-04-07 20:32:49
是有白色的泡的，不是问题，第二张图片还可以，状态很好

但为啥不增殖呢？最后死了。请问你养过吗？
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4楼2014-04-08 16:40:52
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感觉细胞老化。是否换下血清试试？换血清还不行就只能再要细胞。
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5楼2014-04-08 17:13:56
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小雷想

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xuehu2008 at 2014-04-08 17:13:56
感觉细胞老化。是否换下血清试试？换血清还不行就只能再要细胞。

细胞是肝癌细胞，会发生老化吗？
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6楼2014-04-08 19:27:20
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pumaatlarge

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2014-04-08 20:17:26
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地瓜大将军

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

。。。癌细胞不会老化。。
以后不要再提这句了。。肿瘤细胞体外培养也会老化，变异，失去原本特性。
如果购买渠道不正规，细胞的状态会不好，同时可供传代的次数也不足。
从你图片来看，第一张图应该是发生了细胞粘连，这是细胞大面积死亡的前兆。后边几张，细胞轮廓看起来还好，但是不太爆满，同时感觉贴壁也不是很好。不知道是显微镜的问题还是细胞问题。
做一下MTT看看增值吧。
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努力努力努力！
8楼2014-04-08 20:53:44
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小雷想

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pumaatlarge at 2014-04-08 20:17:26
楼主的细胞刚送来的时候胰酶消化的有点过，而且没有摇匀。所以部分细胞扎推生长，一些没有生长空间就分裂迟缓了，就是你说的明亮色浮起来的点。

一般这样细胞涨到80%，我们一般会胰酶短时间处理，，倒去，把生长 ...

不好意思，没有明白你的意思。第一张图就是细胞刚送来时还未做任何处理的图片，在路上已经运输了几天了。其实从第一张图上就能看到好多明亮色的点，但以前养细胞也很少，没有太多经验，所以不明白它们是什么，也没想到它们预示着什么不好的结果。之后我们自己动手养的时候细胞从来没有长到过80%，因为它根本就不增殖，后面这几张图是第一次从刚买来的瓶子里传出来的，一瓶传出了两瓶，也可能是调的密度大所以长的面积还不错，再之后传就再也没有长到30%。
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9楼2014-04-09 15:57:49
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小雷想

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 地瓜大将军 at 2014-04-08 20:53:44
。。。癌细胞不会老化。。
以后不要再提这句了。。肿瘤细胞体外培养也会老化，变异，失去原本特性。
如果购买渠道不正规，细胞的状态会不好，同时可供传代的次数也不足。
从你图片来看，第一张图应该是发生了细胞 ...

第一张图就是刚运过来的时候拍的，后面几张是传出来的，查的这个细胞有个抱团生长的特性，不敢肯定第一张图是细胞本身的特性还是你说的细胞粘连
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10楼2014-04-09 16:01:21
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