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小雷想

铁虫 (正式写手)

[求助] hepg2细胞遇到了大麻烦,求帮助! 已有8人参与

3月18日买的hepg2细胞,以前没有养过,养了一段时间,开始两天还好,但越来细胞表现出死亡的迹象:不增殖,细胞内有很多小的圆圆的亮泡,开始不知道这些细胞内的亮泡是怎么回事,后来查好像说是细胞老化或培养基有问题,培养基:高糖DMEM+10%~12%FBS+1%双抗,培养基鉴定没有污染。可是这是肝癌细胞系呀,怎么会老化呢,癌细胞不是有无限的增殖能力吗,现在细胞快死了,求高手指点,最好是养过这个细胞的高手指点。附图几张:第一张,细胞刚运输来时的照片,其余的是从瓶里传出来及培养几天的图片。谢谢各位了,急呀!图片上红色圈的是圆圆的亮泡。

hepg2细胞遇到了大麻烦,求帮助!
刚买来.JPG


hepg2细胞遇到了大麻烦,求帮助!-1
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hepg2细胞遇到了大麻烦,求帮助!-2
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hepg2细胞遇到了大麻烦,求帮助!-3
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

七楼和八楼说的都挺好。你的细胞第一幅图是多少倍镜下拍出来的,可能是因为拍的原因导致这样的差劲图像。楼主说刚运过来的时候有亮泡,那个是因为细胞在路上颠簸之后导致生长状态变弱细胞贴壁能力下降进而细胞死亡漂浮在悬液之中。后来的图片可以看出细胞的生长状态已有好转,不过还有待很大的提高。楼主可以从消化上下下功夫,你的图中可以明显的看到好多细胞团聚集在一起,那个是因为消化不当引起的。主要可能是:1.消化时间过程,导致细胞消化过度,成片的脱落,出现细胞团;2.消化的过程中不要经常摇晃细胞瓶;3.细胞不要生长到太密,一般不要到八成以上。   还有楼主可以测量下你们的PBS的PH是多少,这个也是会影响细胞的生长状态的。
  这些就是我的建议啦,希望可以帮助到你。祝你好运!!!
不作死不会死!!!
14楼2014-04-25 16:39:36
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c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没记错的话,hepg2应该是mem培养基,当然用dmem也没多大关系。送来的时候细胞状态就不好了。如果是跟正规的机构买的细胞,你可以叫他们再寄一瓶。我觉得可能是你传代的时候消化太久了
2楼2014-04-04 15:35:47
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是有白色的泡的,不是问题,第二张图片还可以,状态很好
3楼2014-04-07 20:32:49
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小雷想

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 叶心飞翔 at 2014-04-07 20:32:49
是有白色的泡的,不是问题,第二张图片还可以,状态很好

但为啥不增殖呢?最后死了。请问你养过吗?
4楼2014-04-08 16:40:52
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