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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-25 22:58:09
不太清楚楼主的细胞怎么回事  先说说我的吧  冻存 10%DMSO 40%血清 50%培养液 十的六次方细胞
4度1H  -20度 1H  -80度1H  液氮  
复苏  37度 速溶  然后加到50毫升离心管(加20毫升无血清培养基 ) 1000rpm 10mi ...

冻存液血清这么高啊。我们实验室的其他同学养别的细胞用10%的血清,冻存的挺好的。我估计还是我冻存时细胞量太大了。我要重新冻存试试。。。
我要我的自由!
11楼2014-04-26 21:14:18
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 22:45:05
细胞量与冻存液的量一般是一比一的。你那样估计是冻存方式上出现了问题了!
...

怎么算1比1啊?质量比?
我要我的自由!
12楼2014-04-26 21:14:51
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stephenreal

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
在96孔板里去复苏,生长面积小,很快能长至汇合,然后数孔传24孔板之1孔,接下来攒足了就传至培养瓶。虽然略显麻烦,但是可以解决一定的问题。
13楼2014-04-26 22:11:22
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wys476488620

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-26 21:14:18
冻存液血清这么高啊。我们实验室的其他同学养别的细胞用10%的血清,冻存的挺好的。我估计还是我冻存时细胞量太大了。我要重新冻存试试。。。...

普通细胞 十的六次方 就行了  杂交瘤细胞是5×10的六次方
踏踏实实的就行了
14楼2014-04-26 22:14:40
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yu756849034

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-26 21:14:51
怎么算1比1啊?质量比?...

你要是2ml的冻存管的话,可以是用细胞培养液1ml把细胞吹下来,转移至冻存管中,再逐滴加入1ml冻存液;也可以直接用冻存液直接吹打细胞制悬液,然后转移至冻存管中即可!
不作死不会死!!!
15楼2014-04-27 08:59:20
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by stephenreal at 2014-04-26 22:11:22
在96孔板里去复苏,生长面积小,很快能长至汇合,然后数孔传24孔板之1孔,接下来攒足了就传至培养瓶。虽然略显麻烦,但是可以解决一定的问题。

好的,我试试,谢谢啊。
我要我的自由!
16楼2014-04-27 11:05:51
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-26 22:14:40
普通细胞 十的六次方 就行了  杂交瘤细胞是5×10的六次方...

那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊?
我要我的自由!
17楼2014-04-27 11:06:54
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-27 08:59:20
你要是2ml的冻存管的话,可以是用细胞培养液1ml把细胞吹下来,转移至冻存管中,再逐滴加入1ml冻存液;也可以直接用冻存液直接吹打细胞制悬液,然后转移至冻存管中即可!...

那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊?
我要我的自由!
18楼2014-04-27 11:07:01
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阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我养的不是HEPG-2,实验室其他人有养过的,虽然细胞不同,但我们冻存和复苏步骤都一样。
冻存:细胞处于对数生长期,铺满皿底80%左右时,可以冻存。冻存液组成为:不完全培养基:胎牛血清:DMSO=6:3:1,每个皿的细胞可以冻存到2~3个冻存管中。将冻存管立即转移到程序降温盒内,-80℃冰箱过夜后,转移到液氮罐中保存。
复苏:从液氮罐中取出冻存管,立即于37℃水浴锅中解冻,融化后将细胞混悬液吸到14mL离心管中,加入培养液吹打混匀,然后1000r/min离心5min,弃上清液,加入新鲜培养液吹打混匀,转移到培养皿(瓶)中就OK了。
你按照这个方法试试,注意等细胞长好了再冻存;复苏后的细胞换液不用太勤,要不细胞贴壁不牢容易冲下来,可以看情况,等细胞长起来后,2~3天再换液。
祝你实验顺利~
物来顺应,未来不迎,当时不杂,既过不恋。
19楼2014-04-27 12:18:19
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yu756849034

木虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-27 11:07:01
那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊?...

做过!
不作死不会死!!!
20楼2014-04-27 21:16:03
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