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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » hepg2 细胞复苏
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-25 22:58:09
不太清楚楼主的细胞怎么回事  先说说我的吧  冻存 10%DMSO 40%血清 50%培养液 十的六次方细胞
4度1H  -20度 1H  -80度1H  液氮  
复苏  37度 速溶  然后加到50毫升离心管（加20毫升无血清培养基 ） 1000rpm 10mi ...

冻存液血清这么高啊。我们实验室的其他同学养别的细胞用10%的血清，冻存的挺好的。我估计还是我冻存时细胞量太大了。我要重新冻存试试。。。
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我要我的自由！
11楼2014-04-26 21:14:18
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 22:45:05
细胞量与冻存液的量一般是一比一的。你那样估计是冻存方式上出现了问题了！
...

怎么算1比1啊？质量比？
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我要我的自由！
12楼2014-04-26 21:14:51
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stephenreal

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在96孔板里去复苏，生长面积小，很快能长至汇合，然后数孔传24孔板之1孔，接下来攒足了就传至培养瓶。虽然略显麻烦，但是可以解决一定的问题。
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13楼2014-04-26 22:11:22
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wys476488620

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-26 21:14:18
冻存液血清这么高啊。我们实验室的其他同学养别的细胞用10%的血清，冻存的挺好的。我估计还是我冻存时细胞量太大了。我要重新冻存试试。。。...

普通细胞 十的六次方 就行了  杂交瘤细胞是5×10的六次方
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踏踏实实的就行了
14楼2014-04-26 22:14:40
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yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-26 21:14:51
怎么算1比1啊？质量比？...

你要是2ml的冻存管的话，可以是用细胞培养液1ml把细胞吹下来，转移至冻存管中，再逐滴加入1ml冻存液；也可以直接用冻存液直接吹打细胞制悬液，然后转移至冻存管中即可！
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不作死不会死！！！
15楼2014-04-27 08:59:20
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by stephenreal at 2014-04-26 22:11:22
在96孔板里去复苏，生长面积小，很快能长至汇合，然后数孔传24孔板之1孔，接下来攒足了就传至培养瓶。虽然略显麻烦，但是可以解决一定的问题。

好的，我试试，谢谢啊。
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我要我的自由！
16楼2014-04-27 11:05:51
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-26 22:14:40
普通细胞 十的六次方 就行了  杂交瘤细胞是5×10的六次方...

那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊？
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我要我的自由！
17楼2014-04-27 11:06:54
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-27 08:59:20
你要是2ml的冻存管的话，可以是用细胞培养液1ml把细胞吹下来，转移至冻存管中，再逐滴加入1ml冻存液；也可以直接用冻存液直接吹打细胞制悬液，然后转移至冻存管中即可！...

那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊？
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我要我的自由！
18楼2014-04-27 11:07:01
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阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我养的不是HEPG-2，实验室其他人有养过的，虽然细胞不同，但我们冻存和复苏步骤都一样。
冻存：细胞处于对数生长期，铺满皿底80%左右时，可以冻存。冻存液组成为：不完全培养基：胎牛血清：DMSO=6：3：1，每个皿的细胞可以冻存到2~3个冻存管中。将冻存管立即转移到程序降温盒内，-80℃冰箱过夜后，转移到液氮罐中保存。
复苏：从液氮罐中取出冻存管，立即于37℃水浴锅中解冻，融化后将细胞混悬液吸到14mL离心管中，加入培养液吹打混匀，然后1000r/min离心5min，弃上清液，加入新鲜培养液吹打混匀，转移到培养皿（瓶）中就OK了。
你按照这个方法试试，注意等细胞长好了再冻存；复苏后的细胞换液不用太勤，要不细胞贴壁不牢容易冲下来，可以看情况，等细胞长起来后，2~3天再换液。
祝你实验顺利~
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物来顺应，未来不迎，当时不杂，既过不恋。
19楼2014-04-27 12:18:19
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yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-27 11:07:01
那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊？...

做过！
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不作死不会死！！！
20楼2014-04-27 21:16:03
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