应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » hepg2 细胞复苏
352/4返回列表上一页1234下一页
查看: 3758  |  回复: 34
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-25 22:58:09
不太清楚楼主的细胞怎么回事  先说说我的吧  冻存 10%DMSO 40%血清 50%培养液 十的六次方细胞
4度1H  -20度 1H  -80度1H  液氮  
复苏  37度 速溶  然后加到50毫升离心管（加20毫升无血清培养基 ） 1000rpm 10mi ...

冻存液血清这么高啊。我们实验室的其他同学养别的细胞用10%的血清，冻存的挺好的。我估计还是我冻存时细胞量太大了。我要重新冻存试试。。。
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
11楼2014-04-26 21:14:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 22:45:05
细胞量与冻存液的量一般是一比一的。你那样估计是冻存方式上出现了问题了！
...

怎么算1比1啊？质量比？
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
12楼2014-04-26 21:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stephenreal

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在96孔板里去复苏，生长面积小，很快能长至汇合，然后数孔传24孔板之1孔，接下来攒足了就传至培养瓶。虽然略显麻烦，但是可以解决一定的问题。
赞一下 回复此楼
13楼2014-04-26 22:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wys476488620

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-26 21:14:18
冻存液血清这么高啊。我们实验室的其他同学养别的细胞用10%的血清，冻存的挺好的。我估计还是我冻存时细胞量太大了。我要重新冻存试试。。。...

普通细胞 十的六次方 就行了  杂交瘤细胞是5×10的六次方
赞一下 回复此楼
踏踏实实的就行了
14楼2014-04-26 22:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-26 21:14:51
怎么算1比1啊？质量比？...

你要是2ml的冻存管的话，可以是用细胞培养液1ml把细胞吹下来，转移至冻存管中，再逐滴加入1ml冻存液；也可以直接用冻存液直接吹打细胞制悬液，然后转移至冻存管中即可！
赞一下 回复此楼
不作死不会死！！！
15楼2014-04-27 08:59:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by stephenreal at 2014-04-26 22:11:22
在96孔板里去复苏，生长面积小，很快能长至汇合，然后数孔传24孔板之1孔，接下来攒足了就传至培养瓶。虽然略显麻烦，但是可以解决一定的问题。

好的，我试试，谢谢啊。
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
16楼2014-04-27 11:05:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by wys476488620 at 2014-04-26 22:14:40
普通细胞 十的六次方 就行了  杂交瘤细胞是5×10的六次方...

那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊？
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
17楼2014-04-27 11:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-27 08:59:20
你要是2ml的冻存管的话，可以是用细胞培养液1ml把细胞吹下来，转移至冻存管中，再逐滴加入1ml冻存液；也可以直接用冻存液直接吹打细胞制悬液，然后转移至冻存管中即可！...

那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊？
赞一下 回复此楼
我要我的自由！
18楼2014-04-27 11:07:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我养的不是HEPG-2，实验室其他人有养过的，虽然细胞不同，但我们冻存和复苏步骤都一样。
冻存：细胞处于对数生长期，铺满皿底80%左右时，可以冻存。冻存液组成为：不完全培养基：胎牛血清：DMSO=6：3：1，每个皿的细胞可以冻存到2~3个冻存管中。将冻存管立即转移到程序降温盒内，-80℃冰箱过夜后，转移到液氮罐中保存。
复苏：从液氮罐中取出冻存管，立即于37℃水浴锅中解冻，融化后将细胞混悬液吸到14mL离心管中，加入培养液吹打混匀，然后1000r/min离心5min，弃上清液，加入新鲜培养液吹打混匀，转移到培养皿（瓶）中就OK了。
你按照这个方法试试，注意等细胞长好了再冻存；复苏后的细胞换液不用太勤，要不细胞贴壁不牢容易冲下来，可以看情况，等细胞长起来后，2~3天再换液。
祝你实验顺利~
赞一下 回复此楼
物来顺应，未来不迎，当时不杂，既过不恋。
19楼2014-04-27 12:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-27 11:07:01
那你有木有做过用吖啶橙染料染细胞啊？...

做过！
回复此楼
不作死不会死！！！
20楼2014-04-27 21:16:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丫头“笑笑” 的主题更新
352/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 9/450 2026-08-21 15:38 by dcqxinyang
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 18/900 2026-08-21 11:53 by wuchongjun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭