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hepg2 细胞复苏 已有8人参与
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我一个月前冻存的细胞，复苏两次了，都以失败告终啊。复苏时细胞量挺多的，但过夜后贴壁的细胞极少，换液后就剩一点儿了。如下图： 继续培养几天就这样了：  知道怎么回事嘛？我的冻存步骤是：收集细胞，加入1ml冻存液（10%DMSO）。4度10min，20度30min，-80度过夜，然后保存在液氮中。 复苏步骤是：从液氮中取出一管细胞后立即放入37度水浴中解冻，快速解冻后，再加入新鲜培养基过夜培养，换液。 能看出我的问题在哪嘛？ |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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我养的不是HEPG-2，实验室其他人有养过的，虽然细胞不同，但我们冻存和复苏步骤都一样。 冻存：细胞处于对数生长期，铺满皿底80%左右时，可以冻存。冻存液组成为：不完全培养基：胎牛血清：DMSO=6：3：1，每个皿的细胞可以冻存到2~3个冻存管中。将冻存管立即转移到程序降温盒内，-80℃冰箱过夜后，转移到液氮罐中保存。 复苏：从液氮罐中取出冻存管，立即于37℃水浴锅中解冻，融化后将细胞混悬液吸到14mL离心管中，加入培养液吹打混匀，然后1000r/min离心5min，弃上清液，加入新鲜培养液吹打混匀，转移到培养皿（瓶）中就OK了。 你按照这个方法试试，注意等细胞长好了再冻存；复苏后的细胞换液不用太勤，要不细胞贴壁不牢容易冲下来，可以看情况，等细胞长起来后，2~3天再换液。 祝你实验顺利~ |
19楼2014-04-27 12:18:19
kueradi
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2楼2014-04-25 14:52:20
yu756849034
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3楼2014-04-25 16:14:44
4楼2014-04-25 16:57:22