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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » hepg2 细胞复苏
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-27 21:16:03
做过！...

太好了。那你是为了看什么啊？染后能看到的荧光都是什么颜色啊？
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我要我的自由！
21楼2014-04-28 09:19:36
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yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-28 09:19:36
太好了。那你是为了看什么啊？染后能看到的荧光都是什么颜色啊？...

就是图片上这种。
hepg2 细胞复苏
QQ截图20140429082824.jpg
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丫头“笑笑”
不作死不会死！！！
22楼2014-04-29 08:30:44
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-29 08:30:44
就是图片上这种。

QQ截图20140429082824.jpg
...

你用吖啶橙染细胞是为了检测什么啊？红色和绿色代表什么啊？
我是为了检测溶酶体膜稳定性的。按原理说吖啶橙在溶酶体中会呈红色或橘红色荧光，在细胞质和细胞核中是绿色荧光。可我染完只能观察到绿色荧光，不知道为什么。
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我要我的自由！
23楼2014-04-29 15:49:39
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我听五月天

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是不是液氮罐有段时间液氮很少，有些细胞离液氮液面比较远导致细胞升温了？我实验室前段时间所有细胞都复苏不了了，有些复苏后跟你的很像。试试离心后用含15%左右FBS的medium培养一夜试试（比较麻烦，还是建议楼主跟别的同学要细胞来用吧，据说这个细胞用小牛血清都可以，应该不难养）。
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为爱而生
24楼2014-04-29 21:45:43
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yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-29 15:49:39
你用吖啶橙染细胞是为了检测什么啊？红色和绿色代表什么啊？
我是为了检测溶酶体膜稳定性的。按原理说吖啶橙在溶酶体中会呈红色或橘红色荧光，在细胞质和细胞核中是绿色荧光。可我染完只能观察到绿色荧光，不知道 ...

我做的是检测细胞凋亡不是检测溶酶体膜稳定性。吖啶橙可以穿过活细胞的细胞膜，少量的穿过死细胞的细胞膜都发黄绿色荧光，只是荧光强度不一样。你的试剂检测溶酶体膜稳定性原理在哪查的，我不怎么清楚你的实验，不过我本人感觉只用一种染料看不出什么差异吧！再说溶酶体不还是在细胞内部吗？ 我的理解就是这样，是不是我理解错了。
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不作死不会死！！！
25楼2014-04-30 09:17:14
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-30 09:17:14
我做的是检测细胞凋亡不是检测溶酶体膜稳定性。吖啶橙可以穿过活细胞的细胞膜，少量的穿过死细胞的细胞膜都发黄绿色荧光，只是荧光强度不一样。你的试剂检测溶酶体膜稳定性原理在哪查的，我不怎么清楚你的实验，不 ...

你下载这篇文献看一下，就看看方法中检测溶酶体稳定性的那一点点就行。我实在是找不到人来讨论了，都没有做过这个实验，也不知道问题出在哪。有挺多文献用这种方法呢。谢谢啊。
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我要我的自由！
26楼2014-04-30 22:19:15
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yu756849034

木虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 丫头“笑笑” at 2014-04-30 22:19:15
你下载这篇文献看一下，就看看方法中检测溶酶体稳定性的那一点点就行。我实在是找不到人来讨论了，都没有做过这个实验，也不知道问题出在哪。有挺多文献用这种方法呢。谢谢啊。...

嗯，客气了。我晚上回来了给你看一下！
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不作死不会死！！！
27楼2014-05-01 14:44:18
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一旺百旺

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

冻存完了不需要离心去掉冻存液
、、、、？？？
离心去掉冻存液以后加入新鲜的培养液，如果细胞状态总是不好可以适当再加点血清的。。或者加点培养液然后离心之后再加培养液。。。
然后细胞培养一小段时间后就换液。。你是不是培养时间太长了。。。。因为培养液里有DMSO，所以，细胞不能培养时间太久。。。
如果还有问题，检查一下DMSO还有血清。一般冻存和复苏的步骤都是那几步，一般问题不是很大的。。。
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28楼2014-05-01 16:27:20
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-05-01 14:44:18
嗯，客气了。我晚上回来了给你看一下！...

非常感谢你一直都这么耐心的帮我解答问题。我今天有打电话问过这篇文献的作者。她没什么耐心，只说这个方法很成熟了，我做不出来不是试剂有问题就是显微镜有问题。我换过显微镜，不会有问题。我是在sigma公司买的acridine orange base。配制的话是用水配制的。作用细胞时是用培养基稀释的。你看有问题吗？
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我要我的自由！
29楼2014-05-01 16:35:16
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丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by 一旺百旺 at 2014-05-01 16:27:20
冻存完了不需要离心去掉冻存液
、、、、？？？
离心去掉冻存液以后加入新鲜的培养液，如果细胞状态总是不好可以适当再加点血清的。。或者加点培养液然后离心之后再加培养液。。。
然后细胞培养一小段时间后就换液 ...

我也离心过的。就是细胞慢慢地都死了。刚开始还有不少贴壁的，然后换一次液死一部分。到后面剩下的细胞形态也很不好。
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我要我的自由！
30楼2014-05-02 11:23:06
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