24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3292  |  回复: 34
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

[求助] hepg2 细胞复苏 已有8人参与

我一个月前冻存的细胞,复苏两次了,都以失败告终啊。复苏时细胞量挺多的,但过夜后贴壁的细胞极少,换液后就剩一点儿了。如下图:



继续培养几天就这样了:



知道怎么回事嘛?我的冻存步骤是:收集细胞,加入1ml冻存液(10%DMSO)。4度10min,20度30min,-80度过夜,然后保存在液氮中。
复苏步骤是:从液氮中取出一管细胞后立即放入37度水浴中解冻,快速解冻后,再加入新鲜培养基过夜培养,换液。


能看出我的问题在哪嘛?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我要我的自由!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你的细胞悬液的量是多少? 你的细胞在4℃放置的时间有点少,不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液,然后分装到两个细胞冻存管中,20℃30min,4℃1h,-20℃2h,-80℃过夜,在转移至液氮之中。每次都能够复苏成功,试了好多次是没有问题的。
不过现在我们实验室买了梯度冻存盒,细胞冻存管密封完之后直接放到梯度冻存盒中放入-80℃过夜,在转移至液氮之中就行了。
不作死不会死!!!
3楼2014-04-25 16:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中,再向其中加入10ml培养基混匀,离心弃去上清,加入培养基重悬,最后加入培养皿中,过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液,我们一般都是细胞贴壁(6h左右)后换液,因为DMSO长时间可能对一些细胞有损伤。
2楼2014-04-25 14:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-25 14:52:20
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中,再向其中加入10ml培养基混匀,离心弃去上清,加入培养基重悬,最后加入培养皿中,过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液,我们一般都是细胞贴壁(6 ...

我也有试过离心后再培养,一样不行的。
我要我的自由!
4楼2014-04-25 16:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 16:14:44
不知道你的细胞悬液的量是多少? 你的细胞在4℃放置的时间有点少,不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液,然后分装到两个细胞冻存管中,20℃30min, ...

我是一个大平皿的细胞用1ml冻存液。细胞量特别大。是不是细胞量太大也不行?
我要我的自由!
5楼2014-04-25 16:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +11 zhn03 2026-03-25 12/600 2026-03-28 13:32 by 唐沐儿
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-24 4/200 2026-03-28 13:17 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 11/550 2026-03-28 13:16 by AZMK
[考研] 321求调剂 +6 材料cailiao 2026-03-21 6/300 2026-03-28 13:14 by 唐沐儿
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +9 丹青奶盖 2026-03-26 10/500 2026-03-28 07:45 by barnett0632
[考研] 085404求调剂,总分309,本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 复试调剂,一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 312求调剂 +9 上岸吧ZJY 2026-03-22 13/650 2026-03-27 11:24 by sanrepian
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
信息提示
请填处理意见