24小时热门版块排行榜    

查看: 3265  |  回复: 34
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

[求助] hepg2 细胞复苏 已有8人参与

我一个月前冻存的细胞,复苏两次了,都以失败告终啊。复苏时细胞量挺多的,但过夜后贴壁的细胞极少,换液后就剩一点儿了。如下图:



继续培养几天就这样了:



知道怎么回事嘛?我的冻存步骤是:收集细胞,加入1ml冻存液(10%DMSO)。4度10min,20度30min,-80度过夜,然后保存在液氮中。
复苏步骤是:从液氮中取出一管细胞后立即放入37度水浴中解冻,快速解冻后,再加入新鲜培养基过夜培养,换液。


能看出我的问题在哪嘛?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我要我的自由!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kueradi at 2014-04-25 14:52:20
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中,再向其中加入10ml培养基混匀,离心弃去上清,加入培养基重悬,最后加入培养皿中,过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液,我们一般都是细胞贴壁(6 ...

我也有试过离心后再培养,一样不行的。
我要我的自由!
4楼2014-04-25 16:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答

kueradi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试一试复苏的时候将冻存的细胞转入15ml离心管中,再向其中加入10ml培养基混匀,离心弃去上清,加入培养基重悬,最后加入培养皿中,过夜。
如果直接将冻存的细胞加入培养皿中的培养液,我们一般都是细胞贴壁(6h左右)后换液,因为DMSO长时间可能对一些细胞有损伤。
2楼2014-04-25 14:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yu756849034

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你的细胞悬液的量是多少? 你的细胞在4℃放置的时间有点少,不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液,然后分装到两个细胞冻存管中,20℃30min,4℃1h,-20℃2h,-80℃过夜,在转移至液氮之中。每次都能够复苏成功,试了好多次是没有问题的。
不过现在我们实验室买了梯度冻存盒,细胞冻存管密封完之后直接放到梯度冻存盒中放入-80℃过夜,在转移至液氮之中就行了。
不作死不会死!!!
3楼2014-04-25 16:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丫头“笑笑”

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yu756849034 at 2014-04-25 16:14:44
不知道你的细胞悬液的量是多少? 你的细胞在4℃放置的时间有点少,不过你的复苏应该是没有问题的。我们实验室的细胞冻存步骤是每一盘细胞用2ml10%的细胞冻存液制细胞悬液,然后分装到两个细胞冻存管中,20℃30min, ...

我是一个大平皿的细胞用1ml冻存液。细胞量特别大。是不是细胞量太大也不行?
我要我的自由!
5楼2014-04-25 16:58:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 5/250 2026-03-19 22:18 by 1049232139
[考研] 0703化学调剂 +9 妮妮ninicgb 2026-03-15 13/650 2026-03-19 22:13 by l1006507827
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +5 吃吃吃才有意义 2026-03-19 5/250 2026-03-19 16:18 by 30660438
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 274求调剂 +6 S.H1 2026-03-18 6/300 2026-03-19 09:34 by 花店相见
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见