24小时热门版块排行榜    

查看: 1300  |  回复: 10

rescuz

金虫 (小有名气)

[求助] 求分析蛋白电泳图象 已有2人参与

如题,分析蛋白电泳图像,左边2条是marker最右边的也是marker,中间是不同诱导剂浓度下诱导处理得到的蛋白,诱导剂浓度逐渐增加,但是点样时,样品压不成行,有扩散到附近孔,我的目的蛋白是14kd左右,marker最小带式10kd,但是觉得样品泳道越往下越看不清楚,而且图形质量也不很好,求请教蛋白上样要注意什么,样品前处理要 注意什么,或者是配胶的问题,怎么改进,希望大家多多出主意,

求分析蛋白电泳图象
iptg不同浓度诱导蛋白 2015-02-07 14hr 50min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在下狒狒

新虫 (初入文坛)

看不到
2楼2015-03-03 14:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang001zh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑的好丑  上样量略微有点大  破菌液一般上2-4ul就可以了,稀释一下上样会更好,上样前样品要煮透

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-03-03 16:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rescuz

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-03-03 16:20:35
跑的好丑  上样量略微有点大  破菌液一般上2-4ul就可以了,稀释一下上样会更好,上样前样品要煮透

我是破碎之后煮沸10min,离心取得上清,上样20ul.你觉得这是样品的原因?
4楼2015-03-03 20:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

在下狒狒

新虫 (初入文坛)

我也存在这个问题,跑到低分子量的时候,条带就模糊了。坛子里面有大神说是跑分离胶的时候电压过大导致低分子量蛋白迁移不规律造成的,说把电压降到80v可能好点。我还没试,想再看看原理再试,欢迎讨论。

P.S. 可能是上样量过大造成的,我一般上样前都会测一下浓度,将上样浓度调整到100ug/ml左右。
5楼2015-03-03 20:22:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
6楼2015-03-03 22:39:54
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

zhang001zh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rescuz at 2015-03-03 20:03:14
我是破碎之后煮沸10min,离心取得上清,上样20ul.你觉得这是样品的原因?...

我一般都是1:10~20破菌,离心后煮五分钟上样,2-5ul,全程200v 一般都还跑的可以

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-03-04 14:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rescuz

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-03-03 22:39:54
小蛋白可以提高胶的浓度到15%,同时分离胶的电压维持在120v,浓缩胶为80v 15min,最后楼主的缓冲液估计也要换了

用的就是15%的蛋白胶
8楼2015-03-04 15:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rescuz

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-03-04 14:14:32
我一般都是1:10~20破菌,离心后煮五分钟上样,2-5ul,全程200v 一般都还跑的可以
...

嗯,是200v来着
9楼2015-03-04 15:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
10楼2015-03-04 16:46:24
已阅   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 rescuz 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +6 myrtle 2026-08-26 9/450 2026-09-02 20:03 by 大飞鱼鱼鱼
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +14 Kittylucky 2026-08-27 15/750 2026-09-02 19:35 by liumei0601
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见