24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

cynthiagrx

捐助贵宾 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 24.5
散金: 20
帖子: 43
在线: 9.7小时
虫号: 1746638
注册: 2012-04-09
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 蛋白电泳条带呈山峰状

求助！最近在大肠杆菌中诱导表达蛋白时，经过镍柱纯化后的蛋白在冰上放置一会后就发生沉淀，我拿沉淀管的上清去跑SDS-PAGE，蛋白条带呈山峰状。大家有遇到过类似问题么，请帮忙解答~~~

回复此楼

» 猜你喜欢

职称评审没过，求安慰已经有56人回复
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章已经有5人回复
26申博自荐已经有3人回复
A期刊撤稿已经有4人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

做电泳时蛋白条带出不来？已经有19人回复
【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳已经有16人回复
大肠杆菌表达42kd的蛋白，蛋白电泳显示只有35kd，测酶活还比较高，这是怎么回事儿呢？已经有9人回复
毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀已经有10人回复
SDS-PAGE蛋白电泳同一蛋白不同loading buffer条带不一样已经有7人回复
就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点已经有28人回复
SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳上样时蛋白样品从孔中飘出已经有29人回复
蛋白电泳脱色后一条带都没有，求助各位大神~~~ 已经有6人回复
大家帮忙看看我的蛋白电泳有目的带吗已经有10人回复
SDS-PAGE 电泳蛋白分子量飘移已经有12人回复
Bio-rad蛋白电泳的问题请教，有图，希望有经验者多多指教！已经有27人回复
蛋白电泳时间变短条带异常已经有18人回复
蛋白凝胶电泳小分子能否跑动已经有7人回复
蛋白质电泳拖尾已经有7人回复
SDS-PAGE蛋白电泳已经有23人回复
蛋白电泳液问题已经有12人回复
SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的已经有5人回复
SDS-PAGE蛋白电泳条带问题已经有7人回复
【求助】请问蛋白电泳的原料应该怎么处理？已经有7人回复
【求助/交流】毕赤酵母表达胞外蛋白，sds电泳后看不到条带已经有7人回复
【求助/交流】蛋白跑还原电泳是一条带，但是跑非还原电泳三四条带，怎么使他产生单一� 已经有7人回复

1楼 2013-03-31 20:40:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖置顶 ( 共有1个 )

myprayer

专家顾问 (著名写手)

BioEPI: 4
应助: 81 (初中生)
贵宾: 2.822
金币: 32407.7
散金: 1696
红花: 158
沙发: 3
帖子: 2275
在线: 822.5小时
虫号: 1759711
注册: 2012-04-16
专业: 生物力学与生物流变学
管辖: 生物医药区

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-01 08:38:55
cynthiagrx: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-01 10:33:44
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-04-27 17:02:27

多做几次或者试着用不同的浓度胶之类的，可以从下面几个方向参考：
一：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里面有配置浓度的指导。
二：就是胶带里位置梯度的PH浓度是否合理，分离胶的浓度一般情况下比较低，所以合适的PH也是做出perfect胶的利器。
三：就是所选用的染料或自发荧光的问题，选择性的使用考马斯亮蓝R-250通常，银盐染料，violet17或者溴化乙锭等染色，这个你可以看一下之前的实验是怎么进行的。
四：可能是你的胶带分离后暗室X放射自显的时候没有曝光好。
五：当时梳子的之后注射混进去微小的气泡，导致胶带不均匀。
最差的就是和之前有人提供的一样，一些试剂可能是假冒伪劣产品，也不排除这种情况。
期待小虫子能跑出完美漂亮的条带，再发个美美的paper

赞一下

回复此楼

2楼2013-03-31 22:43:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

普通回帖

cynthiagrx

捐助贵宾 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 24.5
散金: 20
帖子: 43
在线: 9.7小时
虫号: 1746638
注册: 2012-04-09
专业: 微生物生理与生物化学

引用回帖:

2楼: Originally posted by myprayer at 2013-03-31 22:43:25
多做几次或者试着用不同的浓度胶之类的，可以从下面几个方向参考：
一：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里 ...

想改变浓度试试谢谢啦