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cynthiagrx

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[求助] 蛋白电泳条带呈山峰状

求助！最近在大肠杆菌中诱导表达蛋白时，经过镍柱纯化后的蛋白在冰上放置一会后就发生沉淀，我拿沉淀管的上清去跑SDS-PAGE，蛋白条带呈山峰状。大家有遇到过类似问题么，请帮忙解答~~~

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1楼 2013-03-31 20:40:16

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myprayer

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【答案】应助回帖

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wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-01 08:38:55
cynthiagrx: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-01 10:33:44
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-04-27 17:02:27

多做几次或者试着用不同的浓度胶之类的，可以从下面几个方向参考：
一：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里面有配置浓度的指导。
二：就是胶带里位置梯度的PH浓度是否合理，分离胶的浓度一般情况下比较低，所以合适的PH也是做出perfect胶的利器。
三：就是所选用的染料或自发荧光的问题，选择性的使用考马斯亮蓝R-250通常，银盐染料，violet17或者溴化乙锭等染色，这个你可以看一下之前的实验是怎么进行的。
四：可能是你的胶带分离后暗室X放射自显的时候没有曝光好。
五：当时梳子的之后注射混进去微小的气泡，导致胶带不均匀。
最差的就是和之前有人提供的一样，一些试剂可能是假冒伪劣产品，也不排除这种情况。
期待小虫子能跑出完美漂亮的条带，再发个美美的paper

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2楼2013-03-31 22:43:25

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cynthiagrx

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引用回帖:

2楼: Originally posted by myprayer at 2013-03-31 22:43:25
多做几次或者试着用不同的浓度胶之类的，可以从下面几个方向参考：
一：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里 ...

想改变浓度试试谢谢啦