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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳条带呈山峰状
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cynthiagrx

捐助贵宾 (初入文坛)

[求助] 蛋白电泳条带呈山峰状

求助！最近在大肠杆菌中诱导表达蛋白时，经过镍柱纯化后的蛋白在冰上放置一会后就发生沉淀，我拿沉淀管的上清去跑SDS-PAGE，蛋白条带呈山峰状。大家有遇到过类似问题么，请帮忙解答~~~
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1楼 2013-03-31 20:40:16
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cynthiagrx

捐助贵宾 (初入文坛)
谢谢大家 找到原因了 蛋白量过多 但是loadingbuffer的sds的量与平时一样 导致sds不能完全过量 蛋白电荷不均匀 所以跑出山峰状~~~加大sds量或者降低蛋白浓度都可以~~谢谢大家啦
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7楼2013-04-12 08:55:04
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myprayer

专家顾问 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-01 08:38:55
cynthiagrx: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-01 10:33:44
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-04-27 17:02:27
多做几次或者试着用不同的浓度胶之类的，可以从下面几个方向参考：
一 ：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里面有配置浓度的指导。
二：就是胶带里位置梯度的PH浓度是否合理，分离胶的浓度一般情况下比较低，所以合适的PH也是做出perfect胶的利器。
三：就是所选用的染料或自发荧光的问题，选择性的使用考马斯亮蓝R-250通常，银盐染料，violet17或者溴化乙锭等染色，这个你可以看一下之前的实验是怎么进行的。
四：可能是你的胶带分离后暗室X放射自显的时候没有曝光好。
五：当时梳子的之后注射混进去微小的气泡，导致胶带不均匀。
最差的就是和之前有人提供的一样，一些试剂可能是假冒伪劣产品，也不排除这种情况。
期待小虫子能跑出完美漂亮的条带，再发个美美的paper
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2楼2013-03-31 22:43:25
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cynthiagrx

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myprayer at 2013-03-31 22:43:25
多做几次或者试着用不同的浓度胶之类的，可以从下面几个方向参考：
一 ：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里 ...

想改变浓度试试 谢谢啦
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3楼2013-04-01 10:31:24
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plx1989117

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-02 07:48:40
1 可能胶没配好~胶凝固的不均匀
2 你确定你上样时没有把沉淀颗粒进入吗？最好用loading buffer煮下再离心取上清上样
3 你可以试试用低浓度的SKL溶解沉淀后再与loading buffer混合，煮完上样
希望可以帮到你~
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4楼2013-04-01 22:16:39
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