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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求分析蛋白电泳图象
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rescuz

金虫 (小有名气)

[求助] 求分析蛋白电泳图象 已有2人参与

如题，分析蛋白电泳图像，左边2条是marker最右边的也是marker,中间是不同诱导剂浓度下诱导处理得到的蛋白,诱导剂浓度逐渐增加，但是点样时，样品压不成行，有扩散到附近孔，我的目的蛋白是14kd左右，marker最小带式10kd,但是觉得样品泳道越往下越看不清楚，而且图形质量也不很好，求请教蛋白上样要注意什么，样品前处理要 注意什么，或者是配胶的问题，怎么改进，希望大家多多出主意，

求分析蛋白电泳图象
iptg不同浓度诱导蛋白 2015-02-07 14hr 50min.jpg
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1楼 2015-03-03 11:58:36
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
看不到
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2楼2015-03-03 14:58:28
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zhang001zh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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跑的好丑  上样量略微有点大  破菌液一般上2-4ul就可以了，稀释一下上样会更好，上样前样品要煮透

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3楼2015-03-03 16:20:35
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rescuz

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-03-03 16:20:35
跑的好丑  上样量略微有点大  破菌液一般上2-4ul就可以了，稀释一下上样会更好，上样前样品要煮透

我是破碎之后煮沸10min,离心取得上清，上样20ul.你觉得这是样品的原因？
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4楼2015-03-03 20:03:14
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
我也存在这个问题，跑到低分子量的时候，条带就模糊了。坛子里面有大神说是跑分离胶的时候电压过大导致低分子量蛋白迁移不规律造成的，说把电压降到80v可能好点。我还没试，想再看看原理再试，欢迎讨论。

P.S. 可能是上样量过大造成的，我一般上样前都会测一下浓度，将上样浓度调整到100ug/ml左右。
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5楼2015-03-03 20:22:06
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匿名

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6楼2015-03-03 22:39:54
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zhang001zh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by rescuz at 2015-03-03 20:03:14
我是破碎之后煮沸10min,离心取得上清，上样20ul.你觉得这是样品的原因？...

我一般都是1:10～20破菌，离心后煮五分钟上样，2-5ul，全程200v 一般都还跑的可以

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7楼2015-03-04 14:14:32
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rescuz

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-03-03 22:39:54
小蛋白可以提高胶的浓度到15%，同时分离胶的电压维持在120v，浓缩胶为80v 15min，最后楼主的缓冲液估计也要换了

用的就是15%的蛋白胶
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8楼2015-03-04 15:12:21
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rescuz

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhang001zh at 2015-03-04 14:14:32
我一般都是1:10～20破菌，离心后煮五分钟上样，2-5ul，全程200v 一般都还跑的可以
...

嗯，是200v来着
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9楼2015-03-04 15:12:45
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匿名

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10楼2015-03-04 16:46:24
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