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白纸团子

新虫 (小有名气)

[交流] 菌液测序结果是空载体序列 已有2人参与

做了蓝白斑筛选,菌液验证PCR也能扩出目的条带500bp左右 ,测序是用通用的引物,几批测序结果都是空载体序列,求解释问题出在哪里了

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许三多

木虫 (著名写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-03 22:13:53
菌液检测时,分别用通用引物和特异引物,对应的菌液均有条带,且通用引物比特异引物长(空载通用引物间长度),才必要送测序。摇菌时,也要注意摇菌时间和温度,以免质粒降解
4楼2015-02-03 10:21:40
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-02 21:10:37
没连上,重新连,建议菌液PCR检测时用通用引物。
2楼2015-02-02 12:24:02
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白纸团子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-02-02 12:24:02
没连上,重新连,建议菌液PCR检测时用通用引物。

好的,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-02-02 14:25:47
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白纸团子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 许三多 at 2015-02-03 10:21:40
菌液检测时,分别用通用引物和特异引物,对应的菌液均有条带,且通用引物比特异引物长(空载通用引物间长度),才必要送测序。摇菌时,也要注意摇菌时间和温度,以免质粒降解

用的T载体按说明书16度一小时连接的。感受态是买的DH5a,应该没有问题。做了蓝白斑筛选,菌落长的也很好。验证时只用了特异性引物,目的条带特别亮,,质粒抽提后的电泳条带,只有胶空附近的一条(正常不是三条么)?求指导,,,以前这样都能测序成功,怎么这几次都不行了

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2015-02-03 22:05:01
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