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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液测序结果是空载体序列
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白纸团子

新虫 (小有名气)

[交流] 菌液测序结果是空载体序列 已有2人参与

做了蓝白斑筛选，菌液验证PCR也能扩出目的条带500bp左右 ，测序是用通用的引物，几批测序结果都是空载体序列，求解释问题出在哪里了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-02-01 16:50:59
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白纸团子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-02-02 12:24:02
没连上，重新连，建议菌液PCR检测时用通用引物。

好的，谢谢

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3楼2015-02-02 14:25:47
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-02 21:10:37
没连上，重新连，建议菌液PCR检测时用通用引物。
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2楼2015-02-02 12:24:02
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许三多

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-03 22:13:53
菌液检测时，分别用通用引物和特异引物，对应的菌液均有条带，且通用引物比特异引物长（空载通用引物间长度），才必要送测序。摇菌时，也要注意摇菌时间和温度，以免质粒降解
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4楼2015-02-03 10:21:40
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白纸团子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 许三多 at 2015-02-03 10:21:40
菌液检测时，分别用通用引物和特异引物，对应的菌液均有条带，且通用引物比特异引物长（空载通用引物间长度），才必要送测序。摇菌时，也要注意摇菌时间和温度，以免质粒降解

用的T载体按说明书16度一小时连接的。感受态是买的DH5a,应该没有问题。做了蓝白斑筛选，菌落长的也很好。验证时只用了特异性引物，目的条带特别亮，，质粒抽提后的电泳条带，只有胶空附近的一条(正常不是三条么)？求指导，，，以前这样都能测序成功，怎么这几次都不行了

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5楼2015-02-03 22:05:01
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