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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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涤生2013

铁虫 (小有名气)

[求助] 胶回收连接问题 已有2人参与

10K的载体分步酶切,第一次酶切后胶回收,胶回收后进行第二次酶切,然后纯化,可是纯化后电泳看不见条带,能继续做连接吗,如果可以该加多少量?万分感谢,这个克隆已经做了很久了,做的都没什么自信了,哎,烦人
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yongpan313

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么不两次酶切后在割胶回收,如果酶切buffer不一样可以扩大体系再切,这样一次胶回收得率高。看不到也可以连接试试,我们一般都不再跑胶,直接连接。回收后载体和片段,约1:5 到1:10左右吧,祝好运。
2楼2015-01-31 18:21:46
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13227213581

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室一般是第一遍切做溶液回收,洗脱50%左右,第二次胶回收洗脱10%左右。
可能是你二次洗脱太多被稀释的看不见了。一般少于洗脱浓度小于10ng/ul 跑琼脂糖就看不到明显条带了
justbesunshine
3楼2015-02-02 21:52:56
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