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553173045

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌为什么能够表达出有活性的蛋白已有3人参与

大肠杆菌应该很容易形成包涵体,而且缺乏形成二硫键的修饰,为什么能够形成有活性的蛋白,比如能够表达有活性的青霉素G酰化酶,形成活性蛋白的原理是什么,形成包涵体的原因是什么?请各位大侠帮下忙,解答这个问题,如果有相关的文献,可否发网址给我,谢谢!
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没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
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biowhb

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助! 2015-01-31 20:43:22
大肠杆菌表达的蛋白,分为内源蛋白和外源蛋白。你说的都是外源蛋白。外源蛋白的表达与宿主菌、蛋白定位、蛋白理化性质、蛋白大小、蛋白表达速率等有关。当蛋白定位于胞内,且蛋白表达速率过快,蛋白本身分子间作用力大,蛋白等电点偏离胞内pH环境易于形成包涵体。

活性蛋白,若是可溶性表达,可以表达后直接测活,并不是所有表达蛋白均有活性(只是部分有活性)。
若是包涵体蛋白,则要经变复性,恢复其三维空间结构,恢复其活性。

去CNKI上找找论文,论文有很多的。
生物技术-基因工程制药
2楼2015-01-29 12:27:32
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wanglele87

金虫 (著名写手)

一级结构决定三级结构。
一生不羁放纵爱自由
3楼2015-01-29 12:44:07
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553173045

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biowhb at 2015-01-29 12:27:32
大肠杆菌表达的蛋白,分为内源蛋白和外源蛋白。你说的都是外源蛋白。外源蛋白的表达与宿主菌、蛋白定位、蛋白理化性质、蛋白大小、蛋白表达速率等有关。当蛋白定位于胞内,且蛋白表达速率过快,蛋白本身分子间作用力 ...

大肠杆菌在缺乏二硫键形成机制条件下,形成可溶蛋白也不一定有活性。我想了解活性蛋白形成的策略,我目前想把胰蛋白酶转化大肠杆菌中,可以通过什么元件形成活性蛋白,本身就具有活性。
没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
4楼2015-01-30 15:25:43
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553173045

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanglele87 at 2015-01-29 12:44:07
一级结构决定三级结构。

回答得太简单了!能详细说下形成活性蛋白的策略吗?
没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
5楼2015-01-30 15:26:28
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liuruifeng1318

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得表达出来的是可以形成二硫键,但不一定折叠正确,所以需要在体外重新进行变复性处理,当然不是你做了变复性就一定能正确折叠形成有活性的蛋白的
6楼2015-01-30 16:06:30
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biowhb

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
553173045: 金币+3, 有帮助 2015-02-03 09:03:17
引用回帖:
4楼: Originally posted by 553173045 at 2015-01-30 15:25:43
大肠杆菌在缺乏二硫键形成机制条件下,形成可溶蛋白也不一定有活性。我想了解活性蛋白形成的策略,我目前想把胰蛋白酶转化大肠杆菌中,可以通过什么元件形成活性蛋白,本身就具有活性。...

谁说大肠杆菌没有二硫键形成的机制,蛋白的定位很重要,周质空间和胞外都可以形成二硫键啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
生物技术-基因工程制药
7楼2015-02-01 09:37:25
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biowhb

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 553173045 at 2015-01-30 15:25:43
大肠杆菌在缺乏二硫键形成机制条件下,形成可溶蛋白也不一定有活性。我想了解活性蛋白形成的策略,我目前想把胰蛋白酶转化大肠杆菌中,可以通过什么元件形成活性蛋白,本身就具有活性。...

如果觉得表达部分的活性不太满意,也可以体外进行二硫键的重新改构,用谷胱甘肽就行了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
生物技术-基因工程制药
8楼2015-02-01 09:41:40
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553173045

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by biowhb at 2015-02-01 09:37:25
谁说大肠杆菌没有二硫键形成的机制,蛋白的定位很重要,周质空间和胞外都可以形成二硫键啊
...

嗯,有没有相应的文献,发我一份或者发个网址给我,谢谢!
没有完成不了的事,只有自己愿不愿意去做
9楼2015-02-03 09:07:01
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单车男孩一号

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

表达出来的是可以形成二硫键,但不一定折叠正确,所以需要在体外重新进行变复性处理,当然不是你做了变复性就一定能正确折叠形成有活性的蛋白的
10楼2016-03-23 14:28:57
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