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东方亦雪

铁虫 (初入文坛)

[求助] 常规PCR条带很亮,荧光定量pcr无扩增曲线求解! 已有2人参与

下附图片:pcr电泳图,RT-PCR程序和扩增曲线,17模板浓度最高扩增条带未达到平台期,下面六个梯度无扩增条带,不知道是什么原因,求指教!

常规PCR条带很亮,荧光定量pcr无扩增曲线求解!
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常规PCR条带很亮,荧光定量pcr无扩增曲线求解!-1
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常规PCR条带很亮,荧光定量pcr无扩增曲线求解!-2
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常规PCR条带很亮,荧光定量pcr无扩增曲线求解!-3
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-19 19:03:10
常规PCR的条带也不是很亮啊?marker也一般,偏暗(不知道是不是胶的原因)。没有扩增产物可能是酶的特异性太差http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html,或者是引物设计的不合适,没有扩增出条带,荧光定量PCR时的模板浓度也考虑一下,各方面分析。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-01-19 17:36:26
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-19 19:03:18
优化一下体系。然后在重新看一下tm值以及重新做一次pcr检测
3楼2015-01-19 17:59:20
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