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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 常规PCR条带很亮，荧光定量pcr无扩增曲线求解！
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东方亦雪

铁虫 (初入文坛)

[求助] 常规PCR条带很亮，荧光定量pcr无扩增曲线求解！ 已有2人参与

下附图片：pcr电泳图，RT-PCR程序和扩增曲线，17模板浓度最高扩增条带未达到平台期，下面六个梯度无扩增条带,不知道是什么原因，求指教！

常规PCR条带很亮，荧光定量pcr无扩增曲线求解！
17.jpg


常规PCR条带很亮，荧光定量pcr无扩增曲线求解！-1
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常规PCR条带很亮，荧光定量pcr无扩增曲线求解！-2
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常规PCR条带很亮，荧光定量pcr无扩增曲线求解！-3
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1楼 2015-01-19 17:06:10
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-19 19:03:10
常规PCR的条带也不是很亮啊？marker也一般，偏暗（不知道是不是胶的原因）。没有扩增产物可能是酶的特异性太差http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html，或者是引物设计的不合适，没有扩增出条带，荧光定量PCR时的模板浓度也考虑一下，各方面分析。
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-01-19 17:36:26
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-19 19:03:18
优化一下体系。然后在重新看一下tm值以及重新做一次pcr检测
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3楼2015-01-19 17:59:20
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