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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR可以直接用提取的基因组DNA作为模板吗？
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sophia_p

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光定量PCR可以直接用提取的基因组DNA作为模板吗？ 已有3人参与

还有做绝对定量的时候可以不用做内参基因吧？直接做质粒的标准曲线和样品的标准曲线就可以了吗？
因为刚接触这个，还有点不太明白，求大神解答！
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1楼 2015-01-13 19:21:00
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biot

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以的，你做的是DNA的定量，这样做没有问题。你用质粒作为标准品做标准曲线，最后可以换算出来拷贝数，这是绝对定量。
如果是做转录，表达量的变化，需要提取RNA，反转录为cDNA，然后再做相对定量。
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扬帆起航！
4楼2015-01-15 09:22:10
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红卫大兵

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
当然不可以啊。得用cdna
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2楼2015-01-13 21:16:33
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sophia_p

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-13 21:16:33
当然不可以啊。得用cdna

但是我网上查了下，有的人说又可以。只是基因组DNA里面多了内含子而已啊。
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3楼2015-01-14 14:34:40
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sophia_p

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biot at 2015-01-15 09:22:10
可以的，你做的是DNA的定量，这样做没有问题。你用质粒作为标准品做标准曲线，最后可以换算出来拷贝数，这是绝对定量。
如果是做转录，表达量的变化，需要提取RNA，反转录为cDNA，然后再做相对定量。

谢谢！知道了！
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5楼2015-01-15 18:17:49
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