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押沙龙1989

新虫 (小有名气)

[求助] 半定量pcr一直做不出,很痛苦! 已有6人参与

大家好!我最近在做一植物里面热激转录因子的半定量,一直不稳定,目的基因和内参都是有时扩得出有时扩不出,甚至同一管cDNA也出现这种情况,引物换了,酶也换了,情况还是那样,搞了两三个月一点进展都没有。
        我现在研二,因为是刚接触分子实验老师就让我做半定量,这边也没有师兄师姐可以请教,有时遇到一些问题都很难解决,所以现在心情很是压抑,望各位前辈能给予指导!
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牵牛花呀,一朵深渊色。
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晞朔

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 押沙龙1989 at 2015-01-12 21:56:10
恩,我们这边条件比较差,老师也是让我提了RNA之后在别的实验室去做,多谢前辈了!...

不谢
6楼2015-01-12 21:56:36
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:37:22
RNA、cDNA的质量如何?内参基因都扩不出来吗?先用内参确定你的模板能用。
2楼2015-01-12 17:57:13
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押沙龙1989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-12 17:57:13
RNA、cDNA的质量如何?内参基因都扩不出来吗?先用内参确定你的模板能用。

RNA应该还可以,问了一下别人,也说内参应该扩得出。同一管cDNA内参有时扩得出有时扩不出,总是不稳定。我这边pcr仪挂壁比较严重,P完后25ul有10多ul挂在壁上,这个影响大么?
牵牛花呀,一朵深渊色。
3楼2015-01-12 21:44:58
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晞朔

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 押沙龙1989 at 2015-01-12 21:44:58
RNA应该还可以,问了一下别人,也说内参应该扩得出。同一管cDNA内参有时扩得出有时扩不出,总是不稳定。我这边pcr仪挂壁比较严重,P完后25ul有10多ul挂在壁上,这个影响大么?...

P之前离心一下,不行,换一台PCR仪试试
4楼2015-01-12 21:48:42
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