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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pet28a pet32a蛋白表达大小计算问题
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95846713

新虫 (初入文坛)

[求助] pet28a pet32a蛋白表达大小计算问题

本人目的条带701bp （在182氨基酸遇见第一个终止密码子，第206氨基酸遇见第一个起始密码子）连接pet28a和pet32a 做蛋白表达，用的是载体上的起始密码子，但发现两个载体跑出来的蛋白大小不一样，用pet28a载体表达跑出来26KD左右，用pet32a表达出来是38KD，是不是载体起始密码子不同位置的原因啊？ pet28a的起始密码子是不是Nco I的ATG啊？ pet32a的起始密码子是Trx*tag的TAG还是Nco I的ATG啊？  另外我的目的片段的第182个氨基酸（位于544bp-546bp）是TGA 终止密码子，请问终止密码子之后过了一段若是还有起始密码子还翻译吗？
我是这样算的  [  载体上起始密码子开始翻译的氨基酸开始算到酶切位点翻译的氨基酸数+目的片段翻译的氨基酸数（截止到第一个终止密码子）]×110  算蛋白大小对吗？算出来的蛋白再和page图对比对吗？ 发现用pet28a跑出的条带比算出来的偏大
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1楼 2015-01-11 20:40:37
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