应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 质粒线性化跑胶拖带
61/1返回列表
查看: 3334  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看

相守以诺

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒线性化跑胶拖带

各位虫友，我最近在做重组pPIC9K质粒转化毕赤酵母GS115，用Bpu1102 I 内切酶进行线性化切割，可每次切完以后跑胶都会出现严重拖带，在所要的目的条带（约为11000）处几乎看不到任何条带。之前试过20uL和50uL的体系，可都出现这个问题，酶切时间也有尝试分别用5、3h,可情况均类似。注：重组质粒所加的量约为体系40%，浓度约为0.5-1ug/uL.所附图片为50uL体系的电泳图，三个通道分别为10000DL的maker、酶切质粒、未酶切质粒。

质粒线性化跑胶拖带
酶切.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-11 16:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eulota

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
相守以诺: 金币+5, 博学EPI+1, ★有帮助 2015-01-12 11:27:15
没有酶切的质粒跑的比较干净，酶切后的弥散条带很像是降解
所以，出现这种情况更大的可能性是酶切体系的不稳定：包括酶、缓冲液、水-----都需要排查
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-11 17:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Look_2014

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
相守以诺: 金币+2, ★有帮助 2015-01-12 16:07:03
我们做酶切习惯4度过夜，不知道是不是条件问题，

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
Look
3楼2015-01-11 18:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

相守以诺

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Look_2014 at 2015-01-11 18:06:19
我们做酶切习惯4度过夜，不知道是不是条件问题，

条件的话时间长了才更容易弥散呀？我也是第一次酶切遇到这种情况，之前用其他酶都挺好的。
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-11 18:54:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

相守以诺

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by eulota at 2015-01-11 17:32:02
没有酶切的质粒跑的比较干净，酶切后的弥散条带很像是降解
所以，出现这种情况更大的可能性是酶切体系的不稳定：包括酶、缓冲液、水-----都需要排查

非常感谢你的帮助。酶是从宝生物买的，污染的可能性较小，那就有可能是水喽？有没有可能是这个酶非特异性把其他序列给切割了呢？
赞一下 回复此楼
5楼2015-01-11 18:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eulota

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 相守以诺 at 2015-01-11 18:57:28
非常感谢你的帮助。酶是从宝生物买的，污染的可能性较小，那就有可能是水喽？有没有可能是这个酶非特异性把其他序列给切割了呢？...

酶的非特异性发生和酶所在的工作溶液是有关系的，建议现排除污染的可能性再下结论
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-01-11 19:39:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 相守以诺 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 21:35 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 21:32 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 20:07 by winsaint
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:02 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭