| 查看: 3249 | 回复: 5 | ||
| 本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
质粒线性化跑胶拖带
|
||
各位虫友，我最近在做重组pPIC9K质粒转化毕赤酵母GS115，用Bpu1102 I 内切酶进行线性化切割，可每次切完以后跑胶都会出现严重拖带，在所要的目的条带（约为11000）处几乎看不到任何条带。之前试过20uL和50uL的体系，可都出现这个问题，酶切时间也有尝试分别用5、3h,可情况均类似。注：重组质粒所加的量约为体系40%，浓度约为0.5-1ug/uL.所附图片为50uL体系的电泳图，三个通道分别为10000DL的maker、酶切质粒、未酶切质粒。 酶切.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
297，工科调剂?河南农业大学本科
已经有14人回复
-
0854求调剂
已经有20人回复
-
291求调剂
已经有10人回复
-
26药学专硕105500求调剂
已经有7人回复
-
一志愿华中农业071010，320求调剂
已经有15人回复
-
2026 WR青拔
已经有7人回复
-
一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗
已经有9人回复
-
271求调剂
已经有37人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
300求调剂
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 为什么我提的质粒跑胶时只有两条带？
已经有5人回复
- 质粒线性化有点问题了，求教！！！
已经有8人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 为什么我提的质粒只有一条带？
已经有10人回复
- 提出的质粒跑胶大小偏差严重，单切后跑胶大小正常，请问这现象正常吗？
已经有5人回复
- 提取质粒遇到多条带，求助
已经有19人回复
- 求助——质粒大提跑胶成这样
已经有26人回复
- 提出的质粒跑胶为什么只在2500bp左右，本来应是是5000多bp的？
已经有10人回复
- 急！ 质粒不相容性 线性的两个质粒还会发生这种现象吗
已经有11人回复
- 质粒提取有白色沉淀，跑胶却没条带，啥原因？
已经有24人回复
- 神奇的质粒提取，花儿一样神奇的单酶切跑胶！
已经有34人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- 新手求助——质粒电泳条带问题
已经有15人回复
- 质粒单酶切之后比原始质粒变小了！！！？？
已经有7人回复
- 求助：为什么线性化的质粒回收之后电泳结果不是一条带
已经有11人回复
- 奇怪的质粒电泳图，求解。。
已经有3人回复
- 重组的质粒提取出来线性总是比超螺旋的多很多呢？
已经有4人回复
- 线性化及完整的质粒电泳问题。
已经有23人回复
- 【求助/交流】质粒提取线性化的很多
已经有8人回复
- 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】线性化质粒能在大肠杆菌中表达吗
已经有7人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
- 【求助/交流】环形质粒和线性质粒区别
已经有4人回复
2楼2015-01-11 17:32:02
Look_2014
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1653.7
- 散金: 100
- 红花: 2
- 帖子: 254
- 在线: 43小时
- 虫号: 3152844
- 注册: 2014-04-21
- 性别: GG
- 专业: 妊娠及妊娠相关性疾病
3楼2015-01-11 18:06:19
4楼2015-01-11 18:54:30
非常感谢你的帮助。酶是从宝生物买的，污染的可能性较小，那就有可能是水喽？有没有可能是这个酶非特异性把其他序列给切割了呢？ 5楼2015-01-11 18:57:28
6楼2015-01-11 19:39:17
