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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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bellezmy

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒线性化有点问题了,求教!!!已有5人参与

本人用的是pGAPZαA质粒,已经重组完成,线性化选择Bsp HI酶切位点,但是酶切过后产生两条带,条件是37度,40min,如图所示:

质粒线性化有点问题了,求教!!!
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for5

木虫 (正式写手)

是单切位点么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
操蛋的XX
2楼2014-05-12 14:51:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:55:04
感觉你个质粒像是没有切开,前面的条带是超螺旋质粒
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-12 15:03:41
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:55:14
同意LS的说法,做一个切割时间梯度,切30min 1h  2h 都做一次~
大家相互帮助哈
4楼2014-05-12 16:59:57
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

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bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:09:12
是你的质粒没有完全切开,由上至下,上面一条带是质粒切开了的线性片段,下面一条是你没切开的原质粒,37度,40min,酶切时间太短,建议酶切时间长点,2.5h左右
5楼2014-05-12 17:57:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-12 16:59:57
同意LS的说法,做一个切割时间梯度,切30min 1h  2h 都做一次~

没有必要做时间梯度,一般情况下,五分钟就切开啦,换个单酶切位点的酶试试,做个对照

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-05-12 18:15:45
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-12 18:15:45
没有必要做时间梯度,一般情况下,五分钟就切开啦,换个单酶切位点的酶试试,做个对照
...

快切酶5分钟能切开,如果是普通的酶就不一定啦。多切一会只要是一条带就没问题
大家相互帮助哈
7楼2014-05-12 19:38:27
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-12 19:38:27
快切酶5分钟能切开,如果是普通的酶就不一定啦。多切一会只要是一条带就没问题...

试过了,快切酶只是个噱头,普通的酶照样也切的很快

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-05-12 19:56:07
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way4217

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:09:38
感觉可能是你酶切体系中质粒的浓度有些大,你可以减少质粒的量试一下。
9楼2014-05-13 22:56:29
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