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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒线性化有点问题了，求教！！！
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bellezmy

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒线性化有点问题了，求教！！！ 已有5人参与

本人用的是pGAPZαA质粒，已经重组完成，线性化选择Bsp HI酶切位点，但是酶切过后产生两条带，条件是37度，40min，如图所示：

质粒线性化有点问题了，求教！！！
2014-04-29.jpg
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1楼 2014-05-12 14:42:40
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for5

木虫 (正式写手)
是单切位点么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-05-12 14:51:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:55:04
感觉你个质粒像是没有切开，前面的条带是超螺旋质粒
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-12 15:03:41
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:55:14
同意LS的说法，做一个切割时间梯度，切30min 1h  2h 都做一次~
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大家相互帮助哈
4楼2014-05-12 16:59:57
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:09:12
是你的质粒没有完全切开，由上至下，上面一条带是质粒切开了的线性片段，下面一条是你没切开的原质粒，37度，40min，酶切时间太短，建议酶切时间长点，2.5h左右
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5楼2014-05-12 17:57:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-12 16:59:57
同意LS的说法，做一个切割时间梯度，切30min 1h  2h 都做一次~

没有必要做时间梯度，一般情况下，五分钟就切开啦，换个单酶切位点的酶试试，做个对照

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-05-12 18:15:45
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-12 18:15:45
没有必要做时间梯度，一般情况下，五分钟就切开啦，换个单酶切位点的酶试试，做个对照
...

快切酶5分钟能切开，如果是普通的酶就不一定啦。多切一会只要是一条带就没问题
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大家相互帮助哈
7楼2014-05-12 19:38:27
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-12 19:38:27
快切酶5分钟能切开，如果是普通的酶就不一定啦。多切一会只要是一条带就没问题...

试过了，快切酶只是个噱头，普通的酶照样也切的很快

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2014-05-12 19:56:07
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way4217

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:09:38
感觉可能是你酶切体系中质粒的浓度有些大，你可以减少质粒的量试一下。
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9楼2014-05-13 22:56:29
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