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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒线性化有点问题了，求教！！！
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bellezmy

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒线性化有点问题了，求教！！！已有5人参与

本人用的是pGAPZαA质粒，已经重组完成，线性化选择Bsp HI酶切位点，但是酶切过后产生两条带，条件是37度，40min，如图所示：

质粒线性化有点问题了，求教！！！
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1楼2014-05-12 14:42:40
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猪尾巴草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:09:12
是你的质粒没有完全切开，由上至下，上面一条带是质粒切开了的线性片段，下面一条是你没切开的原质粒，37度，40min，酶切时间太短，建议酶切时间长点，2.5h左右
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5楼2014-05-12 17:57:48
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for5

木虫 (正式写手)
是单切位点么?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-05-12 14:51:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:55:04
感觉你个质粒像是没有切开，前面的条带是超螺旋质粒
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-12 15:03:41
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bellezmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-12 17:55:14
同意LS的说法，做一个切割时间梯度，切30min 1h  2h 都做一次~
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大家相互帮助哈
4楼2014-05-12 16:59:57
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