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质粒线性化跑胶拖带
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各位虫友，我最近在做重组pPIC9K质粒转化毕赤酵母GS115，用Bpu1102 I 内切酶进行线性化切割，可每次切完以后跑胶都会出现严重拖带，在所要的目的条带（约为11000）处几乎看不到任何条带。之前试过20uL和50uL的体系，可都出现这个问题，酶切时间也有尝试分别用5、3h,可情况均类似。注：重组质粒所加的量约为体系40%，浓度约为0.5-1ug/uL.所附图片为50uL体系的电泳图，三个通道分别为10000DL的maker、酶切质粒、未酶切质粒。 酶切.jpg |
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2楼2015-01-11 17:32:02
Look_2014
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
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- 散金: 100
- 红花: 2
- 帖子: 254
- 在线: 43小时
- 虫号: 3152844
- 注册: 2014-04-21
- 性别: GG
- 专业: 妊娠及妊娠相关性疾病
3楼2015-01-11 18:06:19
4楼2015-01-11 18:54:30
非常感谢你的帮助。酶是从宝生物买的，污染的可能性较小，那就有可能是水喽？有没有可能是这个酶非特异性把其他序列给切割了呢？ 5楼2015-01-11 18:57:28
6楼2015-01-11 19:39:17