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jingmi

新虫 (正式写手)

[求助] 多重PCR的引物设计 已有2人参与

比如,我要一次性检测5种细菌。
要怎么设计引物呢?
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IPCAAS

新虫 (小有名气)

同求教,我要一次性检测5种植物病原真菌
2楼2015-01-12 20:46:44
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计五种引物,加一起,用不同的探针就可以了。不闲麻烦的话,五种引物交错比对下。我最多用三重,五重的假阳性太大。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
3楼2015-01-12 23:32:08
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jingmi(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:15:34
jingmi: 金币+7, ★★★★★最佳答案 2015-02-02 16:23:48
设计五种引物,进行多重PCR,如果一种一种检测的话,需要进行五次PCR反应,太耗时耗力了。所以一次性设计五对引物,进行多重PCR的话,可以将你要检测的细菌一次全部检测出来。
不过五对引物的PCR,对引物的要求较高,需要专门的软件设计、检测。同时对反应的特异性也要求很高,尤其是酶,不要使用普通的Taq酶,使用普通Taq可定不会得到好的结果。建议使用特异性好的热启动Taq酶,如果模板不超过10kb的话,也不建议使用高保真酶。个人推荐 Relia热启动Taq酶,扩增人类基因组的6个区域,特异性很好。
http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
希望对你有所帮助。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-13 11:17:34
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那是我的-

铜虫 (小有名气)

请问一下楼主有没有解决,最近也需要呢。
5楼2015-04-13 09:31:34
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