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jingmi

新虫 (正式写手)

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专业: 生物技术药物

[求助] 多重PCR的引物设计已有2人参与

比如，我要一次性检测5种细菌。
要怎么设计引物呢？

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1楼 2015-01-10 10:22:37

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IPCAAS

新虫 (小有名气)

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专业: 植物病理学

同求教，我要一次性检测5种植物病原真菌

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2楼2015-01-12 20:46:44

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781055707

木虫 (著名写手)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

设计五种引物，加一起，用不同的探针就可以了。不闲麻烦的话，五种引物交错比对下。我最多用三重，五重的假阳性太大。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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采菊东篱下，悠然见南山。

3楼2015-01-12 23:32:08

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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jingmi(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:15:34
jingmi: 金币+7, ★★★★★最佳答案 2015-02-02 16:23:48

设计五种引物，进行多重PCR，如果一种一种检测的话，需要进行五次PCR反应，太耗时耗力了。所以一次性设计五对引物，进行多重PCR的话，可以将你要检测的细菌一次全部检测出来。
不过五对引物的PCR，对引物的要求较高，需要专门的软件设计、检测。同时对反应的特异性也要求很高，尤其是酶，不要使用普通的Taq酶，使用普通Taq可定不会得到好的结果。建议使用特异性好的热启动Taq酶，如果模板不超过10kb的话，也不建议使用高保真酶。个人推荐 Relia热启动Taq酶，扩增人类基因组的6个区域，特异性很好。
http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
希望对你有所帮助。