应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长的引物扩增为什么没有条带出现？
101/1返回列表
查看: 3630  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

楠楠1226

新虫 (小有名气)

[求助] 全长的引物扩增为什么没有条带出现？ 已有4人参与

各位大神：我需要的目的片段是3000bp（大豆）,用全长的引物扩增cDNA没有条带怎么回事呢？延伸时间是3min。应该对的呀。有知道的大神帮我分析下吧。J金币不多
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做好自己，加油
1楼 2014-12-31 22:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
楠楠1226(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-01 22:33:03
先确定你的反转效率怎样，可以用一个常用的大片段扩一扩看看；再一个看看你的基因在你取样时期是否表达。你的引物跟cDNA结合怎样，增加些循环数。
赞一下(2人) 回复此楼
hehe
2楼2015-01-01 10:14:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YANJL

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
楠楠1226(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-01 22:33:47
有些序列可能不大好P吧，如果GC含量高的话可是试试加一点DMSO啊，也可以换个酶试一试，我之前P一段3k的，有的引物就P不出来，换了引物就很好P了，我后来用的GXL的酶，你可以试一下。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-01-01 15:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luyongchao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是应该用LA Taq呢（长模板的Taq酶）
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-01 20:35:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果全长扩增不出来，那你可以先设计对应全长序列一部分的引物，设计1-2套，扩增长度短一点的，看看能不能扩增出来，如果能，就说明模板cDNA没有问题，如果不能，就说明模板cDNA有问题。

如果模板cDNA没有问题，下一步就是改进你的扩增体系或者引物。主要有使用长片段聚合酶，引物重新设计；如果这样都不起作用就考虑别的方式了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2015-01-02 07:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

楠楠1226

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by soarrow at 2015-01-02 07:41:37
如果全长扩增不出来，那你可以先设计对应全长序列一部分的引物，设计1-2套，扩增长度短一点的，看看能不能扩增出来，如果能，就说明模板cDNA没有问题，如果不能，就说明模板cDNA有问题。

如果模板cDNA没有问题， ...

好的，谢谢方案。我试试
赞一下 回复此楼
做好自己，加油
6楼2015-01-03 09:49:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

楠楠1226

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2015-01-01 10:14:04
先确定你的反转效率怎样，可以用一个常用的大片段扩一扩看看；再一个看看你的基因在你取样时期是否表达。你的引物跟cDNA结合怎样，增加些循环数。

效率没问题的。谢谢提供建议啦，我再试试
赞一下 回复此楼
做好自己，加油
7楼2015-01-03 09:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

楠楠1226

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by luyongchao at 2015-01-01 20:35:35
是不是应该用LA Taq呢（长模板的Taq酶）

用ex-tag没有扩出来
赞一下 回复此楼
做好自己，加油
8楼2015-01-05 09:35:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
你把扩增片段和引物发来看看，可能引物特异性不强。或做个巢式。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

楠楠1226
采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2015-01-05 16:46:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

楠楠1226

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-05 16:46:36
你把扩增片段和引物发来看看，可能引物特异性不强。或做个巢式。

用Primestar扩增出来了，谢谢啦
赞一下 回复此楼
做好自己，加油
10楼2015-01-06 14:21:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 楠楠1226 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 09:38 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:38 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭