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searush

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 求助 western blot 已有4人参与

请问WB的内参怎么和样品一起跑胶，还有怎么定量蛋白样品及怎么保存蛋白？越具体越好，（本人是新手，求各位大虫帮帮忙）还有湿转60KD左右蛋白条件？

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学术研究

1楼 2014-12-25 21:55:25

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董博士

金虫 (正式写手)

应助: 155 (高中生)
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专业: 医学图像数据处理与分析

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-12-29 23:06:17

首先提取蛋白之后要立即检测浓度，用BCA试剂盒或者考马斯亮蓝检测，测好之后可以按40微克一份制样保存，就是和上样缓冲液一起煮；之后每个孔上同样量的蛋白，这样可以保证内参的一致性，如果检测60kd的蛋白，湿转，稳流150mA,2h即可，同一张膜还可同时检测内参

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医学&统计学

5楼2014-12-28 14:34:47

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