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flyaway7585金虫 (正式写手)
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[求助]
荧光定量扩增不出来 很多检测不到信号是为什么？ 已有1人参与
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跑荧光定量很多样品检测不到信号，能检测到的也是30左右，一两个是12左右的Ct值，内参和目的基因都是一样的情况。为了排除RNA降解的情况，对RNA进行了变性电泳，发现没有降解。为了消除反转的影响，又重新进行了反转，反转后浓度为2000左右，用反转的产物进行PCR扩增发现条带很亮。为了消除荧光染料的影响，借用别人的染料重新跑了一次还是一样的结果。 染料用的是罗氏的，反应体系为：10ul，上下游引物0.3ul，cDNA反转后不稀释（稀释2倍都做过）加1ul，5ul染料，3.4ul水。 1、2、3、4、5分别是RNA电泳图、PCR扩增后电泳图、荧光定量扩增图、荧光定量后对产物跑的电泳图、溶解曲线图。求助各位大侠，到底是哪里出问题了，在线等，谢谢！ 1  PCR.jpg  4.jpg  荧光定量PCRjieguo.jpg  5.jpg |
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小鱼1988
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