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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量扩增不出来 很多检测不到信号是为什么？
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flyaway7585

金虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量扩增不出来 很多检测不到信号是为什么？ 已有1人参与

跑荧光定量很多样品检测不到信号，能检测到的也是30左右，一两个是12左右的Ct值，内参和目的基因都是一样的情况。为了排除RNA降解的情况，对RNA进行了变性电泳，发现没有降解。为了消除反转的影响，又重新进行了反转，反转后浓度为2000左右，用反转的产物进行PCR扩增发现条带很亮。为了消除荧光染料的影响，借用别人的染料重新跑了一次还是一样的结果。 染料用的是罗氏的，反应体系为：10ul，上下游引物0.3ul，cDNA反转后不稀释（稀释2倍都做过）加1ul，5ul染料，3.4ul水。  1、2、3、4、5分别是RNA电泳图、PCR扩增后电泳图、荧光定量扩增图、荧光定量后对产物跑的电泳图、溶解曲线图。求助各位大侠，到底是哪里出问题了，在线等，谢谢！

荧光定量扩增不出来 很多检测不到信号是为什么？
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荧光定量扩增不出来 很多检测不到信号是为什么？-1
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荧光定量扩增不出来 很多检测不到信号是为什么？-3
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1楼 2014-12-09 14:46:57
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shuizong

银虫 (初入文坛)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-16 11:36:22
请问你的问题得到解决了吗？上周我做了两次荧光定量PCR，结果都是出现了有些样品有数值，大部分样品没有数值的。后来发现是我们实验室的仪器有问题，您可以排查下是否和仪器有关。
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上善若水
2楼2014-12-16 09:10:03
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小鱼1988

铁虫 (小有名气)
请问问题后来怎么解决的？我也碰到了类似的问题
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3楼2019-09-24 20:33:50
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eraboy

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

反转录后cDNA要稀释10倍，加2μL作为模板，还有，不同的酶预变性时间也不一样，导致的结果也不一样
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4楼2019-09-25 13:43:36
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