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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

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[求助] 怀疑提质粒时提到了杂菌的质粒，求大家给帮着分析分析已有2人参与

第一次提质粒之后跑了电泳，重组质粒应该是7000，没线性化跑的时候4000那有非常亮的条带，但是7000那只有隐隐约约的条带，而且某些样品点样孔发亮。虽然没线性化看不出实际大小，但大小是差不多的，不会相差3000bp这么多。我用的质粒是pEASY Blunt Simple，空质粒就是4000.
  随后我用通用引物，以质粒为模板跑了PCR，都跑出了3000的目的条带，诡异的是某些样品点样孔依然发亮。第一次跑PCR产物有这种情况。
  然后我又用EcoRI和NotI双酶切过夜，跑了电泳，能切出两条带，并且大小相符。而且没有杂带……
  我以为是我提质粒提不好，又认真的提了一次，还是和第一次一样，4000那非常亮，7000（也就是重组质粒应该在的地方）反而只有隐约的条带。
  当时觉得结果不好都没留图，烦大家看文字吧。

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1楼 2014-12-08 18:00:58

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ggyy0911

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引用回帖:

3楼: Originally posted by stone2239 at 2014-12-08 18:55:00
"虽然没线性化看不出实际大小，但大小是差不多的，不会相差3000bp这么多。"你的这个理解是错误的。要想通过电泳判断载体大小，有两种方法，一种是对载体进行单酶切后电泳，另一种是使用载体电泳专用marke ...

这算是经验之谈吧，我们没有测纯度的仪器，想看有没有蛋白残留之类，以前每次都是线性化的和质粒本身一起跑，相差很小的。

[ 发自小木虫客户端 ]