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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 携带kan抗性的质粒载体菌株在含Amp抗性的平板上生长，这是怎么回事？
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 携带kan抗性的质粒载体菌株在含Amp抗性的平板上生长，这是怎么回事？

我将以前保存的Kan抗性的菌株进行活化，发现在Kan抗性的平板上生长，同时也在Amp抗性的平板上生长，请教各位，这是怎么回事呢？
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相信自己，一定能成功！
1楼 2011-07-15 08:20:28
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hgq115

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-07-15 12:32:36
chui2004(金币+1): 2011-07-20 16:36:26
1、菌株含有杂菌
2、Amp 失效
3、Amp板忘加Amp
4、菌株具有双抗性
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2楼2011-07-15 10:12:16
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hgq115 at 2011-07-15 10:12:16:
1、菌株含有杂菌
2、Amp 失效
3、Amp板忘加Amp
4、菌株具有双抗性

菌株是工程菌株，应该是没有杂菌；Amp失效日期要到2015年，板子上加了AMP的，菌株只具有kan抗性。
我觉得是不是涂布在平板上的菌液浓度太高了以至于在Amp平板上长出菌落。
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相信自己，一定能成功！
3楼2011-07-15 15:41:26
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zhshch2009

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-07-15 20:40:43
是不是平皿搞错了，做个对照就知道了，找两个各带卡纳和氨苄抗性的空载体，一涂见分晓
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4楼2011-07-15 16:31:22
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励应助 2011-07-15 20:40:54
chui2004(金币+1): 2011-07-20 16:35:59
引用回帖:
Originally posted by chui2004 at 2011-07-15 15:41:26:
菌株是工程菌株，应该是没有杂菌；Amp失效日期要到2015年，板子上加了AMP的，菌株只具有kan抗性。
我觉得是不是涂布在平板上的菌液浓度太高了以至于在Amp平板上长出菌落。

1.我们都知道抗生素反复冻融是非常容易失效的，这个跟保质期关系不大，主要看你的保存方法。
2.建议楼主涂个平板测试一下Amp的效价。
3.不知道你用的宿主是什么，可以涂个Amp的板，测试一下宿主对Amp的敏感性
祝你早日成功。
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平生我自知
5楼2011-07-15 17:40:58
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likewind_z

金虫 (小有名气)
lz的工程菌是大肠么？
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6楼2011-07-18 14:06:31
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
Amp是在4度保存的，不用冻融，就是怀疑楼主实验室很多人使用，使用不慎就容易失效了，但是楼主以为没有失效。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-07-18 18:45:24
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ck8148

金虫 (初入文坛)
建议楼主从以下几点分析：
1.Amp的浓度不合适，没有达到抑菌作用
2.Amp失效（这与保质期无关，长期室温放置等都可能是其效率下降）
3.工程菌反复冻融，或有杂菌污染，建议从新划线培养纯化。
4.质粒上原本就含有Amp抗性基因。
前两点的可能性较大，如果有菌的形态及色泽不一样，则第三点的可能性较大。
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8楼2011-07-22 09:45:25
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