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bitdeng

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】苏云金芽孢杆菌(BT)质粒转化 已有4人参与

小弟刚进入实验室,在做BT的转化(BT-Ecoli穿梭质粒电击转化)时,总是先把质粒转入能去甲基化的大肠杆菌中(如ET,scs110),然后再转化到BT中。按理说细菌的限制修饰系统应该是切割去甲基化的外源DNA,可是为什么在转化时要先人为使质粒去甲基化。而且未去甲基化的载体很难转到BT中(本人并没有试过)。有知道的达人麻烦解惑,不甚感激!

[ Last edited by bitdeng on 2010-7-24 at 10:49 ]
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gengce

金虫 (正式写手)

bitdeng(金币+1):多谢 2010-07-22 21:48:44
bitdeng(金币+1): 2010-07-22 21:52:20
大肠杆菌的修饰系统和Bt的修饰系统不一样,简单而言,构建好的质粒是已经修饰过的质粒(主要有甲基化),去甲基化后更能提高转化效率,bt的宿主菌更容易接受外来DNA。Ps你是哪个学校的也做Bt研究?
2楼2010-07-22 15:30:24
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bitdeng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by gengce at 2010-07-22 15:30:24:
大肠杆菌的修饰系统和Bt的修饰系统不一样,简单而言,构建好的质粒是已经修饰过的质粒(主要有甲基化),去甲基化后更能提高转化效率,bt的宿主菌更容易接受外来DNA。Ps你是哪个学校的也做Bt研究?

我农科院的,刚开始实验,发现很多不明白之处,希望能多多交流!此外,对于BT修饰系统,不知道有没有相关文献,希望不吝赐教。
3楼2010-07-22 21:51:53
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gengce

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
哦,你是北京植保所的?还是湖北Bt中心的?
4楼2010-07-23 13:10:41
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飞鸟514

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by gengce at 2010-07-22 15:30:24
大肠杆菌的修饰系统和Bt的修饰系统不一样,简单而言,构建好的质粒是已经修饰过的质粒(主要有甲基化),去甲基化后更能提高转化效率,bt的宿主菌更容易接受外来DNA。Ps你是哪个学校的也做Bt研究?

你好 我也在做苏云金杆菌质粒转化 转了一年也没转进 可否分享小弟下实验操作方法 不胜感激
5楼2016-12-19 17:07:44
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飞翔的鱼干啊

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by gengce at 2010-07-22 15:30:24
大肠杆菌的修饰系统和Bt的修饰系统不一样,简单而言,构建好的质粒是已经修饰过的质粒(主要有甲基化),去甲基化后更能提高转化效率,bt的宿主菌更容易接受外来DNA。Ps你是哪个学校的也做Bt研究?

去甲基化后为什么更能提高转化效率啊?不懂这个怎么回事,能帮忙解释下吗?
6楼2017-02-09 22:11:53
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