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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 绿色荧光的观察
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yesucao

木虫 (正式写手)

[交流] 绿色荧光的观察

本人目前在做绿色荧光蛋白标记，已经构建好载体，转DH5a，也电转了自己的枯草芽孢杆菌，今天用荧光正置显微镜观察绿色荧光的时候，发现不管什么转化或者没转化的菌种只要放上去都有绿色荧光出现，DH5a、枯草芽孢杆菌这些明知是不会出现荧光的也出现了，，而且荧光也只能是在低倍数上观察，倍数高了还看不到了，不知道该怎么办才好啊，还请各位帮我分析一下。
实验室的荧光正置显微镜型号为 ECLIPSEV80i
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1楼 2011-10-25 18:57:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tianchongmy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-26 11:08:21
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了
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6楼2011-10-25 23:51:45
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普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 同意！鼓励交流！ 2011-10-26 11:08:11
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光？
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2楼2011-10-25 21:32:23
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三目

木虫 (小有名气)
★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 11:12:46
你应该是没有去除背景吧，荧光标记的地方一般是高亮的
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3楼2011-10-25 21:38:02
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kukoob

铁杆木虫 (知名作家)
★
yesucao(金币+1):谢谢参与
背景！
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5楼2011-10-25 22:41:26
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stone_66

木虫 (小有名气)
★
yesucao(金币+1):谢谢参与
是否高亮？
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8楼2011-10-26 06:33:31
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Hugbum-Xia

金虫 (著名写手)
★
yesucao(金币+1):谢谢参与
路过，祝顺利
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16楼2011-10-26 08:16:12
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-10-25 21:32:23:
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光？

我是直接挑取平板上的一环菌体制片的，没有菌的地方没有荧光，为黑色，这个看的很清楚，有菌体的地方就是绿色，菌体没有打散的地方，绿色就稍亮一些
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21楼2011-10-26 09:31:43
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三目 at 2011-10-25 21:38:02:
你应该是没有去除背景吧，荧光标记的地方一般是高亮的

去除背景？？怎么去除呢，荧光显微镜观察的时候用的是彩色拍照的，与电脑上面的一个软件相连接，是直接在电脑上操作吗？？目前实验室的那台荧光显微镜没几个人使用，一些不常用的功能有些我们还不知道
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22楼2011-10-26 09:36:38
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tianchongmy at 2011-10-25 23:51:45:
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了

你们所说的背景是指的什么？？印象中有篇文献上面提到能在DH5a中看到荧光，质粒里面包含了一个强启动子，目前的话我也将这个质粒电击到苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌中，昨天也一起看过了，这两个菌看到的也差不多的颜色，比单纯的DH5a颜色要亮一些。
在高倍镜下看荧光的话，电脑扫描不出来，看不到，不能拍照，
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23楼2011-10-26 09:49:56
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cy0708040

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
细胞内的蛋白、核酸等正常成分都有自发荧光，如果你构建的荧光蛋白大量表达，强对比下CCD会过滤掉那些背景的。
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25楼2011-10-26 11:28:37
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by cy0708040 at 2011-10-26 11:28:37:
细胞内的蛋白、核酸等正常成分都有自发荧光，如果你构建的荧光蛋白大量表达，强对比下CCD会过滤掉那些背景的。

今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的
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26楼2011-10-26 13:57:17
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tdong06

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
哈哈，楼主恭喜你，你的菌本来就有自然荧光，不需要标记就可以看的。
开个玩笑哈。
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27楼2011-10-29 21:31:19
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tdong06

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
哈哈，楼主恭喜你，你的菌本来就有自然荧光，不需要标记就可以看的。
开个玩笑哈。
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28楼2011-10-29 21:36:11
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xissy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-26 13:57:17
今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的...

一些底物本来就会有荧光。问题是荧光亮不亮。而且需要去除背景的。
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29楼2014-09-12 10:46:51
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chshchwh

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-26 13:57:17
今天上午直接在平板上挖一点LB固体培养基制片，放在显微镜上也能看到绿色的...

楼主，我也遇到了同样的问题，请问是如何解决的？
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30楼2015-03-10 21:11:40
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gxsun4楼
2011-10-25 22:11   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
jakelly7楼
2011-10-26 01:13   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
mapa6759楼
2011-10-26 07:41   回复  
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198610楼
2011-10-26 07:51   回复  
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dld12311楼
2011-10-26 07:57   回复  
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zhangjunjuan12楼
2011-10-26 08:03   回复  
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davidfrela13楼
2011-10-26 08:05   回复  
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springsunyj14楼
2011-10-26 08:06   回复  
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xcjcqu15楼
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jihaili17楼
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zlh80052218楼
2011-10-26 08:27   回复  
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swma19楼
2011-10-26 08:30   回复  
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大轰炸20楼
2011-10-26 08:39   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
hqwzj198724楼
2011-10-26 10:42   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
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