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yesucao

木虫 (正式写手)

[交流] 绿色荧光的观察

本人目前在做绿色荧光蛋白标记，已经构建好载体，转DH5a，也电转了自己的枯草芽孢杆菌，今天用荧光正置显微镜观察绿色荧光的时候，发现不管什么转化或者没转化的菌种只要放上去都有绿色荧光出现，DH5a、枯草芽孢杆菌这些明知是不会出现荧光的也出现了，，而且荧光也只能是在低倍数上观察，倍数高了还看不到了，不知道该怎么办才好啊，还请各位帮我分析一下。
实验室的荧光正置显微镜型号为 ECLIPSEV80i
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1楼 2011-10-25 18:57:04
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tianchongmy at 2011-10-25 23:51:45:
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了

你们所说的背景是指的什么？？印象中有篇文献上面提到能在DH5a中看到荧光，质粒里面包含了一个强启动子，目前的话我也将这个质粒电击到苏云金芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌中，昨天也一起看过了，这两个菌看到的也差不多的颜色，比单纯的DH5a颜色要亮一些。
在高倍镜下看荧光的话，电脑扫描不出来，看不到，不能拍照，
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23楼2011-10-26 09:49:56
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 同意！鼓励交流！ 2011-10-26 11:08:11
可能是背景吧。你看看没有菌的地方是不是也有荧光？
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2楼2011-10-25 21:32:23
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三目

木虫 (小有名气)
★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 11:12:46
你应该是没有去除背景吧，荧光标记的地方一般是高亮的
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-10-25 21:38:02
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tianchongmy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
yesucao(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-26 11:08:21
肯定是背景，楼主你确定可以在DH5a里表达吗，它的表达量会很低的吧，建议转化一个高效表达的菌看看，可能亮度就更高了
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2011-10-25 23:51:45
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springsunyj14楼
2011-10-26 08:06   回复  
yesucao(金币+1):谢谢参与
查看全部 30 个回答
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