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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » RNA干扰 FAM-miRNA转染细胞观察内吞效率相关问题
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米老鼠的树

银虫 (小有名气)

[求助] RNA干扰 FAM-miRNA转染细胞观察内吞效率相关问题 已有1人参与

鄙人用FAM-miRNA转染MG-63和MC-3T3两种细胞，Lipo2000作为miR的载体，游离的miR作为对照组，不加miR的细胞作为Control组。然后用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率。用荧光显微镜可以观察到比较强的绿色荧光，但是上了流式为什么和不加miR的Control组差别非常小呢？根据直方图算出来的转染效率可能只有10%左右。而且按道理游离的miR很难进入细胞，为什么我用荧光显微镜观察的时候，Lipo+miR组和游离miR组都观察到了很强的荧光，肉眼看上去两个没有太明显的差异？
不会解释这些诡异的实验结果，抓狂啊。。。请各位大虾指教指教~~
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peace
1楼 2014-06-16 15:15:48
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alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-17 01:00:41
米老鼠的树: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-17 11:04:30
唔
观察前有没有洗涤？
我建议最好先用PBS洗涤三次，然后用台盼蓝淬灭胞外荧光，然后再去观察或者检测
流式定量检测还是很准确的
赞一下(1人) 回复此楼
风起，夜未央~流年，乱浮生
2楼2014-06-16 22:24:49
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alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠
我翻了一下你以前的帖子
我果然还应助过你其他的帖子……
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风起，夜未央~流年，乱浮生
3楼2014-06-16 22:25:56
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米老鼠的树

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alxz at 2014-06-16 22:24:49
唔
观察前有没有洗涤？
我建议最好先用PBS洗涤三次，然后用台盼蓝淬灭胞外荧光，然后再去观察或者检测
流式定量检测还是很准确的

多谢哈~有洗涤，但是没有用台盼蓝淬灭。是不是有可能miR都粘附在细胞膜上了？
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peace
4楼2014-06-17 11:07:14
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米老鼠的树

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by alxz at 2014-06-16 22:25:56
我翻了一下你以前的帖子
我果然还应助过你其他的帖子……

我也翻了一下，果然啊，而且都过了半年了我还在问这么弱的问题。。。哎，桑心。
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peace
5楼2014-06-17 11:07:51
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123这样123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alxz at 2014-06-16 22:24:49
唔
观察前有没有洗涤？
我建议最好先用PBS洗涤三次，然后用台盼蓝淬灭胞外荧光，然后再去观察或者检测
流式定量检测还是很准确的

请问台盼蓝猝灭荧光浓度荧光用多少啊，猝灭后需要洗涤再上流式吗？我之前用过0.125%的猝灭效果不是很好，浓度大了会对细胞有影响吗。谢啦谢啦
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6楼2015-06-26 09:42:03
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