24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1828  |  回复: 5

米老鼠的树

银虫 (小有名气)

[求助] RNA干扰 FAM-miRNA转染细胞观察内吞效率相关问题已有1人参与

鄙人用FAM-miRNA转染MG-63和MC-3T3两种细胞,Lipo2000作为miR的载体,游离的miR作为对照组,不加miR的细胞作为Control组。然后用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率。用荧光显微镜可以观察到比较强的绿色荧光,但是上了流式为什么和不加miR的Control组差别非常小呢?根据直方图算出来的转染效率可能只有10%左右。而且按道理游离的miR很难进入细胞,为什么我用荧光显微镜观察的时候,Lipo+miR组和游离miR组都观察到了很强的荧光,肉眼看上去两个没有太明显的差异?
不会解释这些诡异的实验结果,抓狂啊。。。请各位大虾指教指教~~
回复此楼
peace
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-06-17 01:00:41
米老鼠的树: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-17 11:04:30

观察前有没有洗涤?
我建议最好先用PBS洗涤三次,然后用台盼蓝淬灭胞外荧光,然后再去观察或者检测
流式定量检测还是很准确的
风起,夜未央~流年,乱浮生
2楼2014-06-16 22:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alxz

铁杆木虫 (职业作家)

其实我是一只大老鼠

我翻了一下你以前的帖子
我果然还应助过你其他的帖子……
风起,夜未央~流年,乱浮生
3楼2014-06-16 22:25:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米老鼠的树

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alxz at 2014-06-16 22:24:49

观察前有没有洗涤?
我建议最好先用PBS洗涤三次,然后用台盼蓝淬灭胞外荧光,然后再去观察或者检测
流式定量检测还是很准确的

多谢哈~有洗涤,但是没有用台盼蓝淬灭。是不是有可能miR都粘附在细胞膜上了?
peace
4楼2014-06-17 11:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米老鼠的树

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by alxz at 2014-06-16 22:25:56
我翻了一下你以前的帖子
我果然还应助过你其他的帖子……

我也翻了一下,果然啊,而且都过了半年了我还在问这么弱的问题。。。哎,桑心。
peace
5楼2014-06-17 11:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

123这样123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by alxz at 2014-06-16 22:24:49

观察前有没有洗涤?
我建议最好先用PBS洗涤三次,然后用台盼蓝淬灭胞外荧光,然后再去观察或者检测
流式定量检测还是很准确的

请问台盼蓝猝灭荧光浓度荧光用多少啊,猝灭后需要洗涤再上流式吗?我之前用过0.125%的猝灭效果不是很好,浓度大了会对细胞有影响吗。谢啦谢啦
6楼2015-06-26 09:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 米老鼠的树 的主题更新
信息提示
请填处理意见